胆囊收缩素卵黄抗体的生物学活性及其作用机理初探

为了探讨本实验室自制的CCK卵黄抗体的生物学活性及其作用机理，本实验以SD大鼠和AA肉鸡为动物模型，观察日粮添加不同剂量的CCK卵黄抗体粉对其生长性能的影响，并分析部分血清激素水平变化。然后，采用Western blot和ELISA验证大鼠十二指肠能否吸收CCK卵黄抗体，进一步利用RT-PCR分析肉鸡十二指肠和下丘脑的相关基因表达，探讨CCK卵黄抗体的可能作用机理。 一、CCK卵黄抗体粉的制备、检测和提取纯化 本实验室制备的CCK卵黄抗体应用ELISA检测，抗体效价高达1：12800以上。卵黄液经冷冻干燥和钴-60辐射消毒处理后，效价无影响。表明CCK卵黄抗体通过冻干处理及灭菌消毒后，仍保持较高效价，便于贮存、运输及在生产上的应用。 利用水稀释法和盐析法相结合，提取CCK卵黄抗体。提取后的IgY纯度为83.8％。同时，SDS-PAGE电泳显示，IgY分子量为200kDa。 二、CCK卵黄抗体粉对大鼠生长性能及部分血清激素水平的影响 21日龄雄性SD大鼠120只，随机分成4组，分别在基础日粮中添加0、70、150、300mg／kg的CCK卵黄抗体粉，添加剂量不足300mg／kg的以阴性卵黄粉补足。试验过程中，记录大鼠每7天摄食量、每15天体重变化。饲喂42天后，根据体重变化，将试验Ⅰ组(70mg／kg)和对照组大鼠断头采血，离心得血清，并进行屠宰试验，测定肝脏、肾脂肪囊、腹脂以及腓肠肌湿重。 试验结果显示，70mg／kg添加剂量的CCK卵黄抗体粉处理，能显著促进大鼠的体重和体增重(P＜0.05)，150mg／kg和300mg／kg的CCK卵黄抗体粉对大鼠的生长无显著影响(P＞0.05)；各剂量组大鼠部分器官重量、器官指数及平均日摄食量变化不明显(P＞0.05)；同时，70mg／kg的CCK卵黄抗体粉处理后，大鼠血清胰岛素水平有升高趋势(P=0.068)，血清Leptin水平有下降趋势(P=0.067)。 三、CCK卵黄抗体在大鼠十二指肠的吸收 为了探讨CCK卵黄抗体能否被动物胃肠道所吸收，我们应用ELISA和Western blot方法，检测灌胃CCK卵黄抗体后SD大鼠十二指肠静脉血液中CCK卵黄抗体的 张晓萍胆囊收缩素卵黄抗体的生物学活性及其作用机理初探 杭体效价及存在形式.试验采用14只雄性成年SD大鼠，随机分成试验组和对照组， 分别灌胃1 50mg/ml ccK卵黄杭体粉混悬液和生理盐水(2 mU只)。安装亚急性十二指 肠静脉插管，在灌胃后第2、3、4h采集十二指肠静脉血液，分离血浆. ELISA结果显示，试验组大鼠第2、3h血装中，均检测到CCK卵黄抗体效价， 效价达1:128以上.同时，Weatem blot分析发现，试验组第2、3h血浆中存在完整分 子形式的IgY.然而，第4h和对照组血浆中均未检测到IgY. 四、C CK卵黄杭体粉对肉鸡生长性能及部分血清激素水平和相关基因表 达的影响 l日龄AA肉鸡200羽，随机分为4组，分别在基础日粮中添加0、50、70、90mg/kg 的ccK卵黄抗体粉，添加剂量不足90m叭g的以阴性卵黄粉补足.试验持续42天， 记录每周肉鸡体重、耗料量变化.试验结束后，进行屠宰试验，肉鸡断头采血，离心 得血清，根据体重变化，采取试验I组(50m叭g)和对照组十二指肠和下丘脑组织样. 结果显示，50、70、90m叭g的CCK卵黄抗体粉处理，均能显著提高肉鸡体重 和体增重(P<0.05)，其中50m叭g组差异极显著(P<0 .01);各剂量组肉鸡摄食量、月同体 组成无明显变化(P>.05);50、70、90m叭g组肉鸡血清胰岛素水平显著升高，90m叭g 剂量组血清LePtin水平显著下降(P<0 .05);50m叭g的CCK卵黄抗体粉处理后，肉鸡 十二指肠CCK及CCK一AR基因表达与对照组相比均无明显差异(P>0.05)，然而下丘脑 CCK基因表达显著下调，CCK一AR的基因表达显著上调(P<0 .05). 综上所述，CCK卵黄抗体粉既具有较高的抗体效价，也具有生物学活性，能够显 著提高SD大鼠(6 .7%)和AA肉鸡(9 .5%)的生长性能;ccK卵黄杭体能在大鼠十二指 肠段以完整分子形式吸收或部分吸收进入血液，发挥其免疫学效应和生物学效应; CCK卵黄抗体处理能调节机体内分泌，并对中枢系统的CCK及CCK一AR基因表达有 影响.提示，CCK卵黄抗体对动物的促生长作用可能主要是通过调节中枢系统的CCK 及其受体而实现的.