栀子苷衍生物的合成及抗炎免疫活性研究

中药栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实，始载于《神农本草经》，列为中品，其性寒，味微酸而苦，无毒，具有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒的功效，内服用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、目赤肿痛、火毒疮疡，外治扭挫伤痛。栀子又被称为黄栀子、山栀子、黄果树、红栀子等，是一种常绿灌木，其生长地区广泛，主产于浙江、江西、湖北、湖南等地。近些年对栀子及有效成分的研究表明，其在消化系统、心脑血管系统、中枢神经系统及抗肿瘤方面具有广泛的药理作用。栀子苷是一种环烯醚萜的葡萄糖苷，是栀子的主要有效成分，是一种值得重视的丰产易得天然产物，有实验表明，一定剂量的栀子苷对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的保护作用，此外，在植物增产剂、生物检测剂和生物载体等领域应用也比较广泛。但是，由于栀子苷极性大，难以有效分离而得到单体，极大的限制了其应用。此外有研究表明，栀子苷元的半缩醛结构是抗肿瘤必需的活性基团，而且C-4位的取代基对抗氧化活性至关重要，基于此本实验以栀子苷为先导化合物，进行结构改造，设计并合成了一系列栀子苷衍生物，并对其活性进行初步的抗炎免疫活性研究。 具体研究工作包括以下三个部分： 1.栀子苷衍生物的合成 有研究表明，栀子苷元的半缩醛结构是抗肿瘤必需的活性基团，而且C-4位的取代基对抗氧化活性至关重要，基于此本实验以栀子苷为先导化合物，将栀子苷10-位及2',3′,4′,5′位的五个羟基乙酰化和/或11-位引入不同长度碳链的饱和和/或芳香氨取代，以及将7,8位的双键环氧化。栀子苷衍生物的结构解析通过1H-NMR、13C-NMR及TOF-HRMS图谱确认。 2.体外对大鼠抗炎免疫活性筛选研究 本实验旨在观察栀子苷衍生物的免疫调节活性。选择健康SD大鼠，饲养10～15天，取大鼠的免疫细胞(腹腔巨噬细胞)体外给药培养并检测其免疫指标：酶联免疫吸附法测定PGE2的分泌水平；对所选择的栀子苷衍生物的抗炎免疫活性作了初步的筛选。发现1a,1j,2f,1f,1m,1i,2b比母体栀子苷抑制过高的PGE2的产生的作用更强，显示出较好的抗炎免疫活性。 3.体内对小鼠急性肝损伤保护作用的研究 在体外对大鼠抗炎免疫活性筛选研究的基础上，选择1j,1f (即五乙酰化产物GS-Ac及GS-Ac-苯胺)这两个体外抗炎免疫活性较好的栀子苷衍生物，以D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤模型，来探讨其保肝的作用。实验结果表明，栀子苷衍生物1j及1f能降低急性化学性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST活性，提高其肝匀浆SOD、GSH-Px活性，降低肝匀浆MDA及蛋白含量，亦能降低肝脏系数，能明显改善肝组织损伤的程度。在光学显微镜下，病理组织学检查结果表明给予1j及1f后能明显减轻肝组织变性和坏死程度，并减轻炎症反应。以上研究结果提示：1j及1f对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤有明显的预防作用；其保肝的药理学作用机制还有待进一步实验研究。