白花蛇舌草复方提取物抗癌作用的分子机理研究

本实验通过研究白花蛇舌草复方提取物对肿瘤细胞信号传导途径的影响来阐明白花蛇舌草复方提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用的分子机理。 首先用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)测定白花蛇舌草复方提取物对体外培养人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用;然后用Western blot分析了白花蛇舌草复方提取物对PI3K介导的信号传导通路中P-AKT、HIF-1α以及P-MAPK的影响;再用RT-RCR方法检测了HIF-1α下游信号分子VEGF的基因表达水平;最后通过报告基因检测了白花蛇舌草复方提取物对VEGF基因表达的影响。 MTT检测结果表明,白花蛇舌草复方提取物在低浓度时(≤0.2mg/ml)对胃癌SGC7901细胞有增殖作用,这可能是细胞应激作用,而在高浓度时(≥1.0mg/ml)则对胃癌SGC7901细胞的增殖具有明显的抑制作用。Western blot检测结果表明,胃癌SGC7901细胞和前列腺癌DU145细胞经过白花蛇舌草复方提取物处理后,HIF-1α水平显著降低,且表现出浓度和时间依赖性,而P-AKT和P-MAPK水平均没有明显变化。这一结果表明,白花蛇舌草复方提取物中含有信号传导通路抑制剂,但该提取物对信号传导通路的抑制作用可能不是通过P-AKT或者P-MAPK而是通过别的信号传导途径来影响HIF-1α的表达水平,也有可能是直接抑制HIF-1α的表达。RT-PCR检测结果表明,胃癌SGC7901细胞、前列腺癌DU145细胞在经过白花蛇舌草复方提取物处理后,VEGF基因表达水平显著降低,且表现浓度依赖性。报告基因检测结果表明,胃癌SGC7901细胞、前列腺癌DU145细胞、小鼠上皮JB6细胞在经过白花蛇舌草复方提取物处理后,VEGF基因表达水平显著降低,且表现浓度依赖性。RT-PCR和报告基因检测结果表明白花蛇舌草复方提取物对肿瘤细胞VEGF的表达水平有下调作用,其作用机理可能是直接影响VEGF的表达水平或通过下调HIF-1α的表达水平来间接影响VEGF的表达水平。 综上所述,细胞在经过白花蛇舌草复方提取物处理后,HIF-1α的表达水平和下游信号分子VEGF的基因表达水平都出现显著下调,但P-AKT和P-MAPK水平均没有明显变化。这表明,白花蛇舌草复方提取物中含有信号传导通路抑制剂,而且,该提取物对信号传导通路的抑制作用可能是通过别的信号传导途径或直接作用于HIF-1α基因来影响HIF-1α的表达水平并进而影响其下游信号分子VEGF基因的表达水平。虽然具体的信号传导途径还有待于进一步的研究,但是白花蛇舌草复方提取物对肿瘤细胞的抑制作用是肯定的,其作用机理可能就是对信号传导通路的抑制作用,这一研究结果为我们进一步研究白花蛇舌草复方提取物的抗癌作用机理打下了基础,而HIF-1α的表达水平和下游信号分子VEGF的基因表达水平出现显著下调则表明了白花蛇舌草复方提取物对信号传导通路的抑制作用值得进一步深入研究。