京尼平苷在大鼠体内的毒代动力学研究

目的:本课题目的是:（1）建立准确、可靠、高效的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定血浆或组织中的京尼平苷和京尼平;（2）完成大鼠单次灌胃京尼平苷后血浆中京尼平苷和京尼平的同时测定,了解毒性剂量下,京尼平苷和代谢物京尼平的药动学行为与剂量的关系,以及二者的毒代动力学特征与正常剂量下的药代动力学特征的区别;（3）完成大鼠单次灌胃京尼平苷后血浆中京尼平苷和京尼平的同时测定,了解毒性剂量下,京尼平苷和京尼平的药动学行为与性别的关系（4）完成大鼠单次灌胃京尼平苷后组织样品中京尼平苷和京尼平的测定,了解正常剂量和毒性剂量下,二者在大鼠体内的组织分布规律。方法:（1）实验采用乙酸乙酯液液萃取法同时提取血浆或组织匀浆中的京尼平苷和京尼平,以芍药苷为内标,色谱柱为 Agilent ZORBAX Eclipse plus-C18（2.1×150mm,3.5μm）柱;采用电喷雾离子化（ESI）和正离子多离子反应监测（MRM）方式同时检测京尼平苷和京尼平;（2）实验采用单次灌胃给药京尼平苷水溶液的方式,灌胃大鼠京尼平苷剂量为正常剂量（60mg/ml）与毒性剂量（580,700,870mg/ml）后,测得血浆中京尼平苷和京尼平的浓度,得出药时曲线图,比较不同剂量下,京尼平苷主要的药动学参数;（3）灌胃大鼠（雌雄皆有）京尼平苷剂量为700mg/kg后,测得血浆中京尼平苷和京尼平的浓度,得出药时曲线图,比较不同性别下,京尼平苷主要的药动学参数;（4）灌胃大鼠京尼平苷剂量为正常剂量（60mg/ml）与毒性剂量（700mg/ml）后,测得组织匀浆中京尼平苷和京尼平的浓度,得出药时曲线图,比较不同剂量下,京尼平苷和京尼平主要的药动学参数。结果:（1）血浆样品中,京尼平苷和京尼平浓度分别在64.5-12900ng/ml和14.8-2960ng/ml范围内呈现良好的线性关系,方法日内精密度<5.63%,日间精密度<13.22%,方法准确度在95.6-105.9%之间;（2）在组织样品中,京尼平苷和京尼平浓度分别在10.1-2020ng/ml和4.8-960ng/ml范围内呈现良好的线性关系,方法日内精密度<7.25%,日间精密度<13.86%,方法准确度在89.33-106.2%之间;（3）各组大鼠血浆中的京尼平苷的AUC和Cmax经剂量校正后比较,毒性剂量各组之间无显著性差异（p>0.05）,而毒性剂量组与正常剂量组有显著性差异（p<0.05）;（4）毒性剂量下,雌雄大鼠体内京尼平苷的药代动力学参数经统计学分析比较,无显著性差异（P>0.05）;（5）京尼平苷和京尼平在大鼠体内的分布规律不同,京尼平苷在正常剂量组分布情况表现为:肾>血浆>脾>肺>肝>心>脑,毒性剂量组表现为:肾>血浆>肝>脾>肺>心>脑;而京尼平在大鼠体内的分布情况按从大到小的顺序依次为:正常剂量下:肝>血浆>肾>脾>脑>肺>心;毒性剂量下:肝>血浆>肾>脾>心>肺>脑。结论:（1）本文所建立的两种LC-MS/MS方法快速、准确、可靠,适用于血浆和组织样品中京尼平苷和京尼平的同时测定。（2）毒性剂量下,京尼平苷的毒代动学特征与正常剂量下京尼平苷的药代动力学特征比较具有明显的差异。而各毒性剂量组之间,京尼平苷在大鼠体内的含量有随给药剂量的增加而增加的趋势,但就统计学意义来讲,其毒代动力学特征差异不明显,（3）毒性剂量下,性别对于京尼平苷药动学特征无明显影响,而雌性大鼠血浆内的京尼平含量高于雄性,即性别对于京尼平药动学特征可能存在影响。（4）大鼠灌胃京尼平苷后,京尼平苷主要分布于肾中,而京尼平主要分布于肝中,并且随着剂量的增大,二者集中分布于肾或肝的特点更加明显。因此,大剂量京尼平苷的毒性与京尼平苷和京尼平在大鼠组织分布的规律有关,而京尼平大量分布于肝脏这一现象,可能是大剂量下京尼平苷所致肝毒性的重要原因。