茵陈蒿汤水提物和醇提物的成分及药效比较研究

目的 传统水煎汤剂是中药传统剂型之一,在中医临床应用最为广泛。然而随着中药现代化进程的加快,新型中药制剂不断涌现。与传统水煎汤剂不同,现代中药制剂多采用有机溶剂,如乙醇、石油醚等作溶剂,提取物中有效物质(活性组分)的含量、种类均会发生显著变化。但是作为临床药物,其价值在于疗效,因此我们非常关注有机溶剂提取的中药制剂在药效、成分等方面与传统水煎剂比较是否存在某些差异?茵陈蒿汤最早记载于张仲景的《伤寒论》,由茵陈、栀子和大黄三味中药组成,是组方较小的中药复方,具有清热、退黄、祛湿、利胆的功能,是中医治疗湿热黄疸的经典名方,现在也用于各种肝炎、肝纤维化等的治疗,具有很好的应用开发前景。文献表明,茵陈蒿汤对多种因素诱导的肝损伤具有较好的保护作用。然而,茵陈蒿汤不同提取工艺制备的制剂,其成分和疗效存在差异。本研究以茵陈蒿汤为对象,对其水提物和醇提物预防D-氨基半乳糖诱发大鼠急性肝损伤的药效进行比较观察。为进一步揭示两种提取物药效学差异所对应的物质基础,研究中采用薄层色谱及液相色谱方法对茵陈蒿汤水提物和醇提物的化学成分进行分析、比较,探讨水提物及醇提物中活性组分的不同,为茵陈蒿汤化学成分与药效的相关性及中药制剂工艺的研究提供实验数据。 方法 本研究用回流提取法分别制备茵陈蒿汤水提物和醇提物,再分别进行以下实验。 1茵陈蒿汤水提物和醇提物活性组分的差异研究 采用薄层色谱法对茵陈蒿汤水提物和醇提物的化学成分进行比较；采用高效液相色谱法对茵陈蒿汤水提物和醇提物中的栀子苷、大黄素进行含量测定,探讨其水提物及醇提物中活性组分的差异。 2茵陈蒿汤水提物和醇提物的药效学比较研究 以D-氨基半乳糖复制大鼠肝损伤模型,随机分为正常对照组、模型对照组、醇提物高剂量预防组、醇提物低剂量预防组、水提物高剂量预防组、水提物低剂量预防组。水提物和醇提物的高、低剂量组分别以1.67g·kg-1、0.84g·kg+1预防性灌胃给药7d,对照组正常饮食。8d后观察提取物对大鼠血清肝损伤指标的影响,对肝组织进行常规HE染色、冰冻切片油红O染色、琥珀酸脱氢酶染色、葡萄糖-6-磷酸酶染色,观察提取物对肝组织损伤的保护作用。 结果 1.经过单因素实验最终确定：水提物的制备工艺：依次取茵陈、栀子、大黄饮片1200g、600g、400g,混合后10倍量水煎2次,每次30min,过滤,滤液合并,减压浓缩干燥得到水提物。醇提物的制备工艺：取相同量药材,10倍95%乙醇浸泡1h,加热回流提取1h,过滤；第二次加8倍量95%乙醇回流提取1h,过滤,合并滤液,回收乙醇,得到95%醇提物。 2.薄层色谱结果显示：醇提物和水提物的薄层色谱有较大差别。 3.高效液相色谱测定结果表明：水提物中栀子苷、大黄素的含量均低于醇提物的含量。 4.水提物能明显降低模型大鼠血清天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、甘油三酯、总胆红素含量(P<0.05,P<0.01),改善了肝脏的炎症病理状态。醇提物对血清天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶等部分指标有所改善(P<0.05,P<0.01)。形态学上,茵陈蒿汤各治疗组大鼠肝组织病变较模型组均有所减轻。提示：茵陈蒿汤水提物的降胆红素、降甘油三酯活性及保肝作用好于醇提物。 结论 本实验通过薄层色谱及高效液相色谱,揭示了茵陈蒿汤水取提物和醇提物化学成分及质控成分的差异。醇提物所包含的组分与水提物的组分存在较大的差别,且其质控成分含量高于水提物。然而动物实验结果表明茵陈蒿汤水提物的降胆红素、降甘油三酯活性及保肝作用却好于醇提物。这提示：中药水提取和有机溶剂提取可获得不同的有效组分(部位或基团),各自对应不同的“靶标”。研究茵陈蒿汤经方的功能、主治及现代药理机制应沿用传统的水煎提取工艺。