靛玉红体内外代谢研究

靛玉红是中药青黛的抗肿瘤有效成分。该化合物对于慢性粒细胞白血病具有明显的抑制作用。研究发现靛玉红对人体广泛存在的细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)、Src激酶相关的肿瘤细胞生长有抑制作用。靛玉红及其衍生物可能成为针对有CDK、Src激酶参与的肿瘤的新一代抗肿瘤药物。 最近的研究发现靛玉红与丹参酮IIA作为辅助成分可增强APL细胞中四硫化四砷诱导的泛素化和PML - RARα的降解,加强髓样分化调节因子的再程序化和延长G1/G0阻滞期。丹参酮IIA与靛玉红通过增加负责运输硫化砷的水甘油通道蛋白9的含量,促使进入白血病细胞的硫化砷明显增多。 随着靛玉红被逐渐开发利用,对靛玉红的研究以及认识也需进一步深入,有必要对其体内过程进行研究。这对正确评价动物实验数据并外推至人体,指导临床合理用药有重要意义。本研究通过靛玉红的体内外代谢研究来探讨体内外代谢相关性,从而为靛玉红与其他中西药物合用时的安全性与合理性的研究提供部分依据。 第一部分体外研究 拟采用肝微粒体体外孵育实验,研究靛玉红在大鼠肝微粒体内的代谢情况,为理解该药代谢的机制、预测药物相互作用和药物代谢多态性提供依据。采用钙沉淀法制备大鼠肝微粒体,建立了肝微粒体体外代谢研究模型,以靛玉红为底物研究了该药在大鼠肝微粒体中的代谢行为,浓度为100ng/mL的靛玉红在大鼠肝微粒体中孵化3h内,检测到靛玉红的水解、氧化和双氧化代谢物。 建立LC-MS/MS测定肝微粒体孵育液中靛玉红浓度的方法。肝微粒体孵育液样品处理采用液-液提取,提取物经液相色谱-电喷雾串联质谱测定,5分钟内完成靛玉红的检测,工作曲线线形范围1-100ng/mL,日内、日间精密度分别小于3.6%、13.4%,平均回收率在94.0%和104.4%之间,检测限为0.5ng/mL。本方法灵敏度高,特异性好,可以用于肝微粒体孵育液样品的检测。 第二部分体内研究 探讨靛玉红在大鼠体内的代谢行为。选择健康雄性大鼠,灌胃给予靛玉红200mg/kg,连续收集4.5、8.5、12、24、36、48小时时间段的尿液和粪便及4、8、12、24小时时间段的胆汁,经液-液提取后用LC/MS-MS进行分析。检测到尿液、粪便和胆汁中存在13种代谢产物:还原、甲基化、水解、氧化、双氧化、双硫酸化、葡萄糖醛酸化、谷胱甘肽-2H、氧化+谷胱甘肽-2H、氧化+磺化、葡萄糖醛酸化+双氧化、双氧化+谷胱甘肽-2H、双氧化+双葡萄糖醛酸化。