DSX及其成分对体外培养鼠视网膜神经节细胞影响的实验研究

目的:1 建立高压体外培养视网膜神经节细胞模型并观察压力对视网膜神经节细胞的影响；2初步探讨利用体外培养细胞系进行药物成分筛选的顺序；3 观察通瘀开窍中药灯盏细辛提取物(DSX)及其成分对体外培养视网膜神经节细胞的影响。 方法：1 建立大鼠视网膜神经细胞(Retinal Nerve Cells，RNCs)混合培养和视网膜神经节细胞(Retinal Ganglion Cells，RGCs)纯化培养模型。2 将装有RGCs的培养瓶密闭，分别加压至20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg，加压时间1～4小时后收集细胞，用流式细胞仪(FCM)测定凋亡细胞百分率。3在混合培养和纯化培养24小时后的神经细胞或RGCs中加入不同浓度的DSX及其成分DSX1-7、神经生长因子(NGF)、硼酸缓冲液，继续培养24小时，用噻唑兰比色法(MTT法)，测定每组的光密度值(OD值)。4在培养纯化的RGCs中加入DSX7，并密闭加压至80mmHg，4小时后收集细胞，用流式细胞仪测定凋亡细胞百分率。 结果：1 RNCs的混合培养最长可存活2～3周，RGCs的纯化培养可存活时间2～3天。2 压力20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg，加压时间1～4小时均能促进RGCS的凋亡，其凋亡细胞的数目以80mmHg、4小时为最多(P＜0.01)。3(1)在RNCs培养中，5mg／ml、0.5mg／ml、0.05mg／ml、0.005mg／ml浓度的DSX和神经生长因子的OD值高于空白对照组(P＜0.01)。(2)在RNCs培养中，10mg／ml的DSX3组的OD值低于空白对照组(P＜0.01)；2mg／ml、1mg／ml、0.2mg／ml、0.1mg／ml、0.02mg／ml、0.01mg／ml浓度的DSX3和神经生长因子组的OD值高于空白对照组(P＜0.05～0.01)。(3)在RNCs培养中，2mg／ml、1mg／ml、0.2mg／ml、0.1mg／ml浓度的DSX7的OD值高于空白对 照组(p<0.05一0.01)。(4)在RGCs培养中，Zmg/ml、zmg/ml浓度的DSX3的 oD值高于空白对照组(p<0.05)。Zmg/ml、lmg/ml、0.2mg/ml浓度的DsX7 的oD值高于空白对照组(P<0.05一0.01)。4在RGCs以80 mmHg培养4小时 时，浓度lmg/ml的DSX7组的凋亡百分率低于空白对照组和模型组P<0 .01)。 结论:l混合培养的RNCs比纯化培养的RGCs存活时间长。2压力能促 进RGCs的凋亡，其凋亡细胞的数目随压力的增大、时间的延长而增加。3 DSX7 是具有RGCs保护作用的最有效成分。4利用体外培养细胞系进行中药有效成 分的逐级筛选是有效而经济的方法之一。