骨髓间充质干细胞促进皮肤创面上皮化的实验研究

目的：通过建立猪皮肤全层缺损创面的动物模型比较骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BM-MSCs)在微粒皮、小皮片移植环境下能否促进创面上皮化,而加速创面愈合,及其可能机制予以探讨。为皮肤缺损的临床修复提供新的治疗思路和方法。 方法：滇南小耳猪2头,雌雄各一(昆明医学院实验动物中心提供,实验动物许可证号SYXK2005-004),抽取骨髓经密度梯度离心法及体外培养方法扩增、纯化BM-MSCs,培养至第3--5代留取备用。每头猪脊柱两侧分别制作12个皮肤全层缺损创面,创面大小为3cm×3cm,实验组和对照组各12个,共计48个创面。实验组A：微粒皮+BM-MSCs+异体皮移植；实验组B：自体小皮片+BM-MSCs移植：实验组C:BM-MSCs+异体皮移植。对照组a：微粒皮+异体皮移植；对照组b自体小皮片移植；对照组c：PBS+异体皮移植。术后7天、14天创面取材,做组织病理学检查评价组织病理等级,免疫组化染色Ki67、广谱角蛋白(CKp),real-time PCR检测TGF-β1mRNA、KGF-1mRNA的表达水平。 结果：创面组织病理学检查发现,术后第7天、14天,实验组(A、B组)较对照组(a、b组)创面愈合的组织病理等级评分有统计学差异(P<0.05),优于对照组。Ki67免疫组化染色显示,术后第7天、14天,实验组(A、B组)表皮基底层细胞增殖活性较对照组(a、b组)高。广谱角蛋白(CKp)免疫组化染色显示,术后14天,实验组单纯移植间质干细胞组(C组)发现创面CKp染色阳性细胞。real-time PCR检测结果提示,术后第7天TGF-β1mRNA实验组(A、B、C组)较对照组(a、b、c组)表达较显著降低(P<0.05)；第14天实验组较对照组表达无显著统计学差异(P>0.05)。术后第7天KGF-1mRNA实验组较对照组表达较显著升高(P<0.05)；第14天实验组较对照组表达无显著统计学差异(P>0.05)。 结论：1、移植创面的BM-MSCs能够促进微粒皮、小皮片组织成活,促进上皮化,促进创面愈合。2、移植于创面的BM-MSCs,在创面微粒皮及小皮片组织微环境的作用下,调节细胞因子TGF-β1、KGF-1等的分泌,从而参与创面调控加速表皮细胞增殖有关。3、BM-MSCs根据创面修复的需要,可能分化成为表皮细胞等,参与创面修复。