表达马立克氏病病毒糖蛋白B基因的重组火鸡疱疹病毒的构建

马立克氏病（MD）是由马立克氏病毒（MDV）引起的一种鸡的淋巴组织增 生性疾病，是鸡的三大主要传染病之一。对它的研究对养禽业有很重要的经济学意 义。 本研究从感染致弱的Ⅰ型马立克氏病病毒（MDV）814株的细胞中提取病毒 基因组DNA，以digoxingenin标记强毒GA株MDV糖蛋白B（gB）基因片段作 为探针，进行Southern-blot杂交定位。将包含MDV814株gB基因的基因组片段 克隆pUC19质粒中。酶切鉴定后，进行序列分析。结果表明该gB基因具有高度 的保守性，编码区序列同已发表的Ⅰ型马立克氏病病毒gB基因序列完全一致，但 启动子区有差异。 将SV40早期启动子控制的大肠杆菌β-半乳糖苷酶（LacZ）基因插入到火鸡疱 疹病毒（HVT）A抗原（gA）基因，构建了HVT转移载体质粒（pgALacZ）。pgA LacZ与HVT DNA共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），获得了稳定表达LacZ基因产物 的重组HVT（LacZ-rHVT）。LacZ-rHVT经体内、体外传代表明LacZ基因表达稳 定；同时证明HVT gA基因属于HVT复制的非必需基因。在此基础上，将马立 克氏病毒B抗原（MDVgB）基因插入gA基因中，构建了含MDVgB基因的HVT 转移载体质粒（pHMDVgB）。pHMDVgB与LacZ-rHVT DNA共转染CEF，获得 了含MDVgB基因的重组HVT（MDVgB-rHVT）。采用PCR扩增及Dot blot杂交 检测gB-rHVT DNA中的gB基因，证实MDV gB基因已插入到HVT；采用间接 免疫荧光法证实MDVgB基因得到表达。