急性脑梗死患者血小板磷酸二酯酶、钙离子变化及银杏叶提取物对其调节作用机理研究

环核苷酸(cAMP和cGMP)与钙离子(Ca2+)是相互间具有调节作用的两大信号系统。磷酸二酯酶(PDE)调节环核苷酸水平,继而影响到Ca2+。有研究表明,某些组织的一些PDE亚型或参与某些疾病的发生发展,或在其中发挥保护作用。血小板在血栓形成性疾病的发生发展中起重要作用,血小板含有多种PDE亚型,因此,脑血栓形成患者的血小板PDE及Ca2+可能也会有改变。银杏叶提取物(EGB)是目前在中国及欧美国家应用最广泛的植物药,它包含多种成分具有众多的药理活性。临床药理表明,一些通过抑制血小板PDE活性,从而提升环核苷酸、降低胞浆游离钙离子(Ca2+i)的药物如西洛他唑、MY5445,能有效抑制血小板功能。最近陆续报道EGB具调节某些组织PDE活性的作用。EGB有明确的抗血小板聚集作用,那么,它是否也是通过作用于血小板PDE来抑制血小板聚集的呢? 目的:1、观察急性脑梗死患者血小板PDE活性、环核苷酸、Ca2+i的变化。2、体外观察EGB对PDE活性、核苷酸环化酶(AC和GC)活性、环核苷酸、Ca2+i、血小板聚集率的影响,探讨EGB抗血小板聚集的可能机制;观察EGB与银杏达莫(即EGB+双嘧达莫)对血小板功能影响的差异,探讨其机制。3、临床验证EGB对急性脑梗死患者血小板PDE3活性、cAMP、Ca2+i的影响,观察其临床疗效。方法:1、30例急性脑梗死患者,分别于第1、4、8、15天测定其血小板PDE活性、环核苷酸水平、Ca2+i水平。10例年龄相当的健康体检者为正常对照。2、采取2周内未服任何药物的3位健康志愿者肘静脉血(3.8%枸橼酸钠抗凝),将血小板分离洗涤后,分别观察各种浓度的EGB、双嘧达莫、银杏达莫对血小板聚集率(比浊法)、环核苷酸水平 (EIA法)、Ca2+i 水平(Fluo-3AM标记后上激光共聚焦显微镜检测) 及血小板经超声匀浆后分离的PDE、核苷酸环化酶活性(EIA法)的影响,设空白对照组(加同等体积药物溶剂)。酶活性的表示方法――PDE:每毫克蛋白每分钟催化水解cAMP或cGMP 的pmol数;核苷酸环 化酶:每毫克蛋白每分钟催化形成cAMP或cGMP的pmol数。3、15例急性脑梗死患者,给予EGB治疗,分别于用药前、用药后第1、3、7、14天测定其血小板PDE3活性、cAMP水平、Ca2+i水平,并于用药前及用药后第14天进行神经功能缺损评分、血液流变学检查,作为临床疗效评价指标。以前面的30例急性脑梗死患者为对照。结果:1、急性脑梗死患者二周内血小板PDE2、PDE3活性降低,cAMP降低,胞浆Ca2+i升高;PDE5活性及cGMP无变化;Ca2+i变化与cAMP间呈线性相关,PDE2、PDE3活性变化与胞浆Ca2+i、cAMP间均无相关性。2、EGB剂量依赖性抑制ADP、PAF诱导的血小板聚集、提升cAMP水平、抑制PDE3活性、抑制ADP、PAF诱导的Ca2+i升高;大剂量时对PDE5有轻度抑制作用;对cGMP水平、PDE2活性、AC和GC活性、静息血小板Ca2+i水平无影响。3、在抑制血小板聚集、提升cAMP、抑制Ca2+i升高方面,EGB与双嘧达莫合用具协同作用,对各PDE亚型活性未发现有协同抑制作用。4、EGB可使急性脑梗死患者血小板PDE3活性进一步下降,大大提升cAMP水平,降低胞浆Ca2+i浓度,改善血液流变学及神经功能缺损情况。结论:1、脑梗死急性期血小板功能处于活化状态,血小板PDE2、PDE3在其中起保护作用,但这种作用较弱。2、EGB具抑制血小板PDE3活性,继而提升cAMP,降低胞浆Ca2+i作用,这可能是其抗血小板聚集机制之一。3、EGB与双嘧达莫通过协同提升cAMP水平、降低Ca2+i浓度来协同抑制血小板聚集。4、EGB可使急性脑梗死患者血小板PDE3活性进一步下降,加强PDE3在脑梗死急性期的保护作用,有效抑制血小板聚集,改善血液循环及神经功能缺损。