口腔厌氧菌内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞和骨细胞的生物学效应及其相关临床研究

本文从细胞水平探讨感染根管内G-厌氧菌内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞、破骨细胞和成骨细胞的影响，为牙髓、尖周病的发病和防治提供实验依据，进行下列各项研究。 1 内毒素的提取和纯化 采用4株国际标准株。牙髓类杆菌（Be）(ATCC 35406)产黑类杆菌（Bm）(ATCC 25845)中间类杆菌（Bi）(ATCC 25261)具核梭杆菌（Fn）(ATCC 25586)。厌氧条件下培养，收集菌后，依Galanos的PW加PCP法提取和纯化内毒素脂多糖。提取率分别为：Be 2.67％、Bm3.23％、Bi2.96％、Fn2.77％。经分析：所提取内毒素纯度高，物理、化学性能稳定，活性较高。 2 内毒素对人牙髓、牙周病成纤维细胞的直接损伤作用 2．1 人牙髓、牙周膜成纤维细胞的培养和鉴定 采用组织块培养法对40例人的正常年轻恒牙的牙周膜和牙髓组织进行体外培养。牙髓成纤维细胞培养成功率为17.5％，牙周膜成纤维细胞为50％。细胞作生长曲线和分裂指数观察：5代后细胞生长旺盛；分裂正常，但牙髓细胞生长速率慢于牙周膜细胞。经ABC法作细胞的抗波形丝蛋白和抗角蛋白抗体染色证明其来源于中胚层的成纤维细胞。细胞的超微结构呈正常像。 2．2 内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞的细胞毒性 4种内毒素配制成50μg／ml、100μg／ml、250μg／ml、500μg／ml 4种浓度。分别作用于牙髓成纤维细胞、牙周膜成纤维细胞和L929成纤维细胞系，连续观察7d。用MTT法作内毒素的细胞毒性检测。结果为：内毒素的细胞毒作用具有明显的浓度依赖性和时间依赖性。在50μg／ml浓度下，在5d前对细胞无细胞毒性，而在100μg／ml以上浓度，随浓度的升高和时间的延长，具有明显的细胞毒性作用。其IC50