阳虚质膝骨性关节炎关节软骨中PKC、β-Catenin、MMP-13表达的相关性研究

目的:应用临床流行病学方法调查膝骨性关节炎(KOA)中医体质类型分布特点及相关发病因素,在确定KOA中高发体质类型为阳虚质的基础上,应用免疫组化和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法从分子水平探讨阳虚质膝骨性关节炎与蛋白激酶C(PKC)、β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属酶13(MMP13)表达之间的相关性。深入分析西北地区阳虚质膝骨性关节炎患者的相关发病机制,为阳虚质KOA的辨析提供客观依据,为中医药辨体防治该病提供新的思路和治疗靶点。方法:应用临床流行病学方法,参照《中医体质分类与判定》标准,制订“阳虚质膝骨性关节炎与Wnt/β-Catenin信号通路调体研究”统一设计的研究调查表。判定KOA患者中医体质类型,收集关节软骨标本,建立KOA患者中医体质数据库。在数据库中随机选取KOA病例组共20例,其中非阳虚质KOA 10例,阳虚质KOA 10例;正常非KOA患者对照组10例。应用文献循证方法选择在KOA的发病过程中,与关节软骨代谢密切相关的基因(蛋白激酶C、β-连环蛋白、基质金属酶13)。利用分子生物学研究,采用免疫组化及RT-PCR方法,检测三种基因在不同组别中的表达。分析KOA与健康对照组、阳虚质KOA与健康对照组、非阳虚质KOA与阳虚质KOA、非阳虚质KOA与健康对照组中三种基因的表达情况。结果:(1)在对406例膝骨性关节炎调查中发现阳虚质、气虚质、气郁质是膝骨性关节炎患者的常见发病体质,其中阳虚质164例,占40.39%,气虚质117例,占28.82%,气郁质65例,占16.01%。(2)免疫组化研究显示:PKC、MMP-13在正常关节软骨及阳虚质KOA与非阳虚质KOA中均有表达,表达主要位于细胞浆及细胞核内,组间进行两两比较,均具有明显差异(P<0.05),具有统计学意义;β-catenin在正常对照组关节软骨中表达为阴性,在阳虚质KOA组与非阳虚质KOA组均有表达,表达主要位于细胞核内,病例组两者比较,无明显差异(P>0.05),无统计学意义。(3)RT-PCR研究显示:PKC、MMP-13基因在正常对照组与KOA病例组关节软骨组织中的表达进行比较,均具有显著统计学意义(P<0.01);PKC、MMP-13基因在阳虚质病例组、非阳虚质病例组与对照组进行两两比较(P<0.05),差异均有统计学意义。β-catenin基因在正常对照组中无明显表达,与KOA病例组关节软骨组织中的表达进行比较,具有明显差异;β-catenin基因在阳虚质病例组、非阳虚质病例组之间进行比较(P>0.05),差异无统计学意义。结论:(1)再次证实了阳虚质是KOA的高发体质类型。(2)PKC基因与KOA的发病有一定相关性,且可能与阳虚质高发KOA有密切相关性。(3)β-catenin基因与KOA的发病有一定相关性,但与阳虚质高发KOA无密切相关性。(4)MMP-13基因与KOA的发病有一定相关性,且可能与阳虚质高发KOA有密切相关性。