基于大鼠HSP探讨王氏益经方对肾虚痰湿型多囊卵巢综合征模型大鼠的作用机制

目的本课题旨在运用中医基础理论,采用芳香化酶抑制剂来曲唑造模,从大鼠体重、卵巢重量和体积、性激素水平、HE染色卵巢形态学特征、热休克免疫球蛋白HSP27、HSP47、HSP90在大鼠卵巢中的表达率等方面来探讨王氏益经方对肾虚痰湿型多囊卵巢综合征模型大鼠的作用机理,从而为王氏益经方治疗肾虚痰湿型多囊卵巢综合征提供科学理论依据。方法1.分组采取随机数字法将实验选择的雌性6周龄清洁级SD大鼠60只分为六组,每组十只,划分为正常组、模型组、达英-35组,三个中药组(王氏益经方高剂量组、中剂量组、低剂量组)。2.造模及治疗造模期间,除正常组10只外,其余组采用芳香化酶抑制剂来曲唑造模,连续灌胃给药21天。治疗期间,除正常组和模型组生理盐水灌胃,对照组采用达英-35,三组中药组按高中低剂量采用王氏益经方,连续灌胃给药15天。期间定时测量各组大鼠体重、摄食情况并记录。3.标本采集与检测实验结束后腹主动脉取血放免法检测各组大鼠血清T、LH、FSH、LH/FSH比值;取双侧卵巢组织称量各组大鼠卵巢体重、并计算体积;肉眼观测各组卵巢特征;HE染色及放免法检测各组大鼠卵巢形态及热休克蛋白HSP27、47、90图像分析;放免法检测各组大鼠卵巢热休克蛋白HSP27、HSP47、HSP90表达水平。结果1.大鼠体重六组大鼠体重中,以模型组大鼠体重增长幅度最大,正常组大鼠体重增长幅度最小,其余四组均有不同幅度的增长,但不超过模型组。2.肉眼下大鼠卵巢特征六组大鼠中,模型组大鼠与其它五组相比较,卵巢表面苍白,可见体积较大,间质增多。其余五组相比较,高剂量中药组较达英-35组大鼠卵巢肉眼观良好。3.大鼠血清性激素水平3.1 T水平:正常组大鼠血清T最低,模型组大鼠血清T最高。各治疗组与模型组相比,P<0.05,差异性显著。达英-35组和各中药组给药治疗后,血清T不同幅度降低,以中药高剂量组最为明显。3.2 LH水平:模型组LH最高,与正常组对比P<0.05,差异性显著,造模成功。各治疗组与模型组相比,P<0.05,差异性显著。达英-35组和各中药治疗组差异无统计学意义,P>0.05,说明各治疗组均能降低LH,以中药高剂量组效果最为明显。3.3 FSH水平:正常组大鼠血清FSH最高,模型组与正常组对比,P<0.05,模型大鼠血清FSH最低,造模成功。各治疗组与模型组相比,P<0.05,差异性显著。达英-35组与各中药组P>0.05,无显著性差异。3.4 LH/FSH比值水平:模型组LH/FSH比值最高,与正常组相比,P<0.05,差异性显著。各治疗组与模型组相比,P<0.05,差异性显著。各中药组和达英-35组相比,均P<0.05,具有统计学意义。以中药高剂量组最佳。4.放射免疫法检测大鼠卵巢HSP27、HSP47、HSP90表达水平4.1在模型组大鼠卵巢组织中,HSP27表达水平较其他五组大鼠卵巢组织低。4.2在模型组大鼠卵巢组织中,HSP90表达水平较其他五组大鼠卵巢组织低。4.3在模型组大鼠卵巢组织中,HSP47表达水平较其他五组大鼠卵巢组织高。5.热休克蛋白卵巢形态学5.1 HSP27:高表达于正常组大鼠卵巢成熟卵泡的卵母细胞及原始卵泡的卵母细胞中。5.2 HSP90:高表达于正常组大鼠卵巢成熟卵泡的卵母细胞、间质细胞、颗粒细胞。5.3 HSP47:低表达于正常组大鼠卵巢成熟卵泡的卵巢间质细胞。结论王氏益经方通过调整大鼠内分泌系统,降低血清中T、LH、LH/FSH的值,并通过调节机体免疫热休克蛋白HSP27/90/47在大鼠卵巢中的表达水平,在动物实验中得到肯定疗效。王氏益经方为有效的临床经验方之一,本研究探讨了王氏益经方临床治疗肾虚痰湿型多囊卵巢综合征的作用机制,为其提供了科学理论依据。