刺五加多糖对断奶仔猪免疫功能的调控作用及机理研究

本研究通过二个动物饲养试验及一个动物细胞体外培养试验,系统地探讨了刺五加多糖(ASPS)对断奶仔猪免疫功能的调控作用及其作用机理。 (1)研究不同水平的ASPS对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响,筛选ASPS的适宜添加量。将96头断奶仔猪随机分为6个处理,分别饲喂添加0、150、300、500、800、1000mg/kg ASPS的饲粮,试验期21d。试验第14d,仔猪肌肉注射OVA：试验第14和21d,测定生长性能,采血测定血液指标。试验结果表明：随ASPS添加量增加,仔猪ADG、FCR、外周血白细胞数量、淋巴细胞数量、淋巴细胞转化率、CD4淋巴细胞业群含量、IFN-y和皮质醇水平均呈二次曲线变化(P<0.05),外周血IL-2水平呈线性改善(P＜0.05)；ASPS对血清IL-4、OVA抗体、IgG、IgA、IgM抗体水平无显著影响(P>0.05)；综合生长性能和免疫功能考虑,ASPS适宜添加量为800mg/kg.结果提示,ASPS能提高仔猪的细胞免疫功能和抗断奶应激能力,改善断奶仔猪的生长性能。 (2)注射LPS构建仔猪的免疫应激模型,研究ASPS缓解免疫应激仔猪的生长抑制及免疫调控的作用机理。试验采用2×2因素设计,即饲粮处理和免疫应激处理,试验期21d。将64头断奶仔猪随机分为2组(每组8个重复),分别饲喂添加0或800mg/kg ASPS的饲粮,试验第14和21d,给每组4个重复的仔猪腹腔注射LPS,另4个重复注射等量生理盐水。注射后3h和第2d,采血测定血液指标。结果表明：①ASPS对试验1-14d仔猪的生长性能无影响(P>0.05),但缓解了因注射LPS导致的试验14～21d仔猪ADG和ADFI的下降(P<0.05)；②ASPS提高了淋巴细胞转化率和试验第15d CD4"、CD8+淋巴细胞亚群含量(P＜0.05),缓解了因注射LPS导致的CD4+/CD8+比值的上升(P<0.05)；③ASPS缓解了免疫应激仔猪血浆IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、皮质醇、葡萄糖、NEFA和α-AGP水平的升高(P＜0.05),提高了血浆IL-10、TP、GH和IGF-I水平(P＜0.05),降低了UN浓度(P＜0.05),对胰岛素水平无影响(P>0.05)。结果提示,ASPS缓解免疫应激仔猪的生长抑制与其减少前炎性细胞因子的分泌,从而间接影响机体的内分泌调节有关；ASPS调节应激仔猪的免疫功能是通过直接影响T淋巴细胞而起作用。 (3)研究ASPS对免疫应激仔猪脾脏IL-1β、ILF6和TNF-α mRNA相对表达量的影响。试验设计同(2)。试验第21d,仔猪注射LPS后3h,从每个重复中取1头仔猪屠宰取脾脏。试验结果表明：ASPS显著降低了脾脏IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达量(P＜0.05),且能缓解免疫应激仔猪脾脏IL-6、IL-1β和TNF-α mRNA相对含量上升(P<0.05)。结果提示,ASPS缓解免疫应激仔猪的生长抑制是从分子水平上降低了前炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α mRNA的相对含量而实现的。 (4)研究ASPS对体外培养的仔猪外周血淋巴细胞信号传导通路的影响。结果表明：①随ASPS浓度增加,B细胞增殖无变化(P＞0.05),T细胞增殖呈二次曲线变化(P<0.05),且较高剂量ASPS (80、160、320、μg/mL)对其影响显著(P<0.05)。②随ASPS浓度增加,IL-4水平无显著变化(P>0.05),IL-2水平呈二次曲线变化(P<0.05),且随培养时间和ASPS浓度变化表现出剂量和时间依赖关系。③无anti-TLR4处理时,N0、iNOS、NF-κB和TNF-α水平随ASPS浓度增加呈二次曲线变化(P＜0.05),anti-TLR4孵育淋巴细胞悬液后,ASPS对这些指标无影响(P＞0.05)。④ASPS对仔猪外周血淋巴细胞内cAMP、cGMP浓度和cAMP/cGMP匕值的影响具有时间和剂量依赖性,作用20min,80、160μg/mL ASPS显著提高了淋巴细胞内cAMP浓度和cAMP/cGMP比值(P<0.05),降低了cGMP浓度(P＜0.05)。作用60min,320μg/mL ASPS对上述指标出现显著影响(P<0.05)。结果提示,ASPS能增强体外培养的淋巴细胞的细胞免疫功能,ASPS可能通过与淋巴细胞表面TLR4受体结合,影响淋巴细胞内cAMP、cGMP等信号分子浓度,通过提高NF-KB活性从而影响TNF-α等细胞因子的浓度。