姜黄素对宫颈癌Hela细胞株放疗增敏的作用及其机制研究

目的：研究姜黄素对宫颈癌Hela细胞株的细胞毒性作用及其放疗增敏作用，并探讨其可能的增敏机制，为姜黄素能够作为宫颈癌的放疗增敏剂应用于临床提供理论依据。 方法：（1）以人宫颈癌Hela细胞为研究对象。四唑盐（MTT）比色实验检测姜黄素和放射线单独作用以及放射线与姜黄素联合应用时对Hela细胞增殖的抑制作用,确定射线最佳工作剂量以及姜黄素最佳工作浓度。（2）克隆形成实验观察姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的放疗增敏作用，在倒置显微镜下计数含50个细胞以上的集落数，计算出细胞存活分数（SF），比较射线单独作用与射线和姜黄素联合作用后细胞的增殖能力。（3）流式细胞法检测姜黄素和放射线单独作用以及放射线与姜黄素联合应用后宫颈癌Hela细胞的周期分布及凋亡情况，结果用Multicycle软件进行分析。（4）Western-blot法检测姜黄素和放射线单独作用以及放射线与姜黄素联合应用后宫颈癌Hela细胞中P53、P21、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。 结果：（1）不同浓度的姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的均有生长抑制作用，并呈时间和浓度依赖性；在射线剂量为12Gy以内时，射线对Hela细胞的生长抑制作用呈现出一定的量效和时效关系，当辐射剂量大于12Gy时，细胞增殖抑制率不再随射线剂量的加大和作用时间的延长而增加；不同浓度姜黄素和12Gy照射剂量共同作用时，姜黄素浓度为3.125-25μmol／L时对Hela细胞的毒性显示出明显的浓度依赖性，25μmol／L以上浓度的姜黄素对宫颈癌Hela细胞毒性未见明显增加。通过上述结果确定随后进行的增敏实验所选取的射线最佳工作剂量为4GY，姜黄素最佳工作浓度为25μmoL／L。（2）不同剂量的射线单独作用与姜黄素和不同剂量的射线联合作用，均可抑制人宫颈癌Hela细胞集落形成，并且联合应用比射线单独作用抑制更加显著，由此，姜黄素对人宫颈癌Hela细胞具有放疗增敏作用。（3）与空白组比较，姜黄素与放射性均能使细胞周期阻滞于放射敏感时相G2/M期，诱导细胞凋亡（p﹤0.05），放射性与姜黄素联合作用比单独作用阻滞及诱导凋亡效果更加显著（p﹤0.01，p=0.000）。（4）Western blot法检测各处理组P53、P21、Bax、Bcl-2蛋白表达情况，结果表明姜黄素与放射性均能升高P53、P21、Bax蛋白的表达，降低Bcl-2蛋白的表达（p<0.05），放射线与姜黄素联合作用比单独作用变化更加显著（p<0.01）。 结论：（1）姜黄素及X射线均对人宫颈癌Hela细胞具有细胞毒性作用。（2）姜黄素对人宫颈癌Hela细胞具有放疗增敏作用。（3）姜黄素对人宫颈癌Hela细胞的放疗增敏作用可能与阻滞细胞周期于G2/M期、诱导细胞凋亡、上调p53、p21蛋白及下调Bcl-2/Bax比例有关。