三种姜黄色素体外抗肿瘤作用研究

目的：从姜黄中提取分离出姜黄素、一脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素；比较姜黄素及其衍生物体外抗肿瘤作用及作用机理,为开发利用姜黄素类化合物奠定基础。 方法：①采用乙醇渗漉、石油醚脱脂、硅胶柱色谱分离、丙酮纯化等方法从姜黄中提取姜黄素、一脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素,用高效液相测定姜黄素及其衍生物的纯度。②采用MTT法检测姜黄素及其衍生物对人肝癌细胞HepG2的抑制作用；分光光度法检测其对Caspase-3酶活性的影响；RT-PCR法检测其对人肝癌细胞HepG2Caspase-3基因的表达；免疫组化法检测其对人肝癌细胞HepG2Caspase-3蛋白的表达。③采用MTT法检测姜黄素及其衍生物对人脐静脉内皮细胞增殖的影响；用琼脂糖刮除法检测姜黄素及其衍生物对人脐静脉内皮细胞HUVEC迁移的影响；用鸡胚绒毛尿囊膜法观察姜黄素及其衍生物对血管生成的抑制作用。 结果：①从姜黄中分离出纯度较高的姜黄素、一脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素,经高效液相检测纯度达到90%以上。②三种姜黄色素对人肝癌细胞HepG2都有抑制作用,且一脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素在浓度6μmol·L-1～24μmol·L-1的范围内,随着其浓度的增加,抑制作用增强。三种姜黄素色素都能增强HepG2细胞Caspase-3酶的活性,且高浓度的二脱甲氧基姜黄素活化Caspase-3的程度高于一脱甲氧基姜黄素和姜黄素。免疫组织化学方法结果发现,三种姜黄色素都可增强HepG2细胞Caspase-3蛋白的表达,且高浓度的二脱甲氧基姜黄素活化Caspase-3的程度高于一脱甲氧基姜黄素和姜黄素。这和RT-PCR检测HepG2Caspase-3mRNA的表达结果一致。③三种姜黄色素能抑制人脐静脉内皮细胞增殖,对人脐静脉内皮细胞迁移也有明显抑制作用；高剂量下,内皮细胞迁移抑制作用表现为：姜黄素>一脱甲氧基姜黄素>二脱甲氧基姜黄素。鸡胚绒毛尿囊膜实验说明三种姜黄色素对新生血管具有一定程度的抑制作用,姜黄素中、高剂量组明显抑制血管生成,二脱甲氧基姜黄素作用大于姜黄素。 结论：①从姜黄中成功分离提取高纯度的姜黄素及其两个天然衍生物(一脱甲氧基姜黄素和二脱甲氧基姜黄素)；②三种姜黄色素对人肝癌细胞HepG2都有抑制作用,都能刺激Caspase-3的表达,二脱甲氧基姜黄素效果最好；这可能也是它体外抑制肝癌细胞HepG2生长的机理之一。③姜黄素及其衍生物具有抗血管生成作用,二脱甲氧基姜黄素的抑制效果相对较好。