牡丹组织培养技术的初步研究

本文以牡丹不同品种的鳞芽和带有腋芽的茎段为外植体，探讨了不同的消毒方式及消毒时间对外植体消毒的影响；研究不同的基本培养基、不同的植物生长调剂物质、不同的附加物质和不同的环境因子在腋芽的诱导、增殖以及壮苗生长过程中的作用，分析了不同培养过程中主要影响因子及其有效浓度使用范围；同时以健壮的无菌试管苗为材料，探讨了愈伤组织诱导和增殖过程中主要的影响因子及其有效的浓度范围；同时又以花药为外植体，探讨了愈伤组织诱导过程中主要的影响因子及其有效的浓度范围。实验结果如下： 1、在外植体的消毒试验中，以0.1％HgCl2为消毒剂进行消毒处理，结果表明：牡丹鳞芽适合的消毒方式为二次消毒，适合的时间为6min／6min，带有腋芽的茎段消毒时间较鳞芽短，时间以6min为宜。 2、以‘乌龙捧盛’、‘洛阳红’、‘鲁荷红’、‘肉芙蓉’和‘赵粉’5个牡丹品种的鳞芽为外植体进行诱导培养，结果表明：品种以‘乌龙捧盛’和‘鲁荷红’表现较好，采集时间以1～2月份为宜，其诱导率分别为88％和82％。 3、以‘乌龙捧盛’和‘鲁荷红’为材料进行增殖培养，结果表明：2品种的无菌试管苗在增殖过程中，适宜的基本培养基为改良MS，适宜的细胞分裂素为TDZ，浓度以0.1mg·L-1时效果较好；继代3次时2个品种无菌试管苗增殖系数最高，分别为5.2和5.3；光质比例可调节的LED光源对牡丹无菌试管苗的增殖和生长状况均无明显的促进作用；普通荧光灯，当光照强度为30001x时，能明显的促进试管苗的生长，出现黄化现象的叶片较少，叶片颜色较低光强下深，植株较低光强下高、健壮；CO2施肥和不同浓度的蔗糖对牡丹无菌试管苗的增殖无促进作用，但当CO2为3000ppm、蔗糖浓度为20g·L-1时，试管苗的生长状况良好，新出叶片颜色浓绿，植株较高，只有外围叶片出现黄化。 4、以‘乌龙捧盛’和‘鲁荷红’为材料进行壮苗培养，试验结果表明：水解乳蛋白、酪蛋白和亚精胺对这2个品种无菌试管苗的生长无明显的促进作用，而PP333能够有效的减少无菌试管苗生长过程中黄叶的出现，浓度以1.0mg·L-1效果较好，但植株较矮，植株呈现深绿色。 5、以‘乌龙捧盛’的无菌试管苗为材料进行愈伤组织诱导，试验结果表明：薄细胞层的厚度对愈伤组织诱导影响最大，最佳培养基为：MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+TDZ0.05mg·L-1+2，4-D5.0mg·L-1AgNO30.2mg·L-1，片层厚度为0.5～0.8mm效果最佳。 6、在愈伤组织的继代培养中，试验结果表明：活性炭能有效的抑止褐化现象的产生，用量为0.1％效果较好，蔗糖和多胺对愈伤组织的生长没有明显的促进作用，随着蔗糖和多胺浓度的增加，愈伤组织出现自然死亡现象。 7、以‘洛阳红’的花药为外植体进行愈伤组织诱导，试验结果表明：花药诱导愈伤组织诱导的最佳培养基为：MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA3.0mg·L-1+2，4-D1.0mg·L-1+TDZ0.05mg·L-1，消毒时间以3min为宜。