竹叶多糖提取、分离及检测技术研究

竹子是禾本科，竹亚科多年生常绿植物，在我国具有悠久的食用和药用历史。为了加强对竹叶的综合利用，本研究以毛竹为研究对象，对竹叶多糖的提取、纯化、检测及活性进行研究，通过单因素试验和正交试验考察了温度、时间、固液比、提取次数对多糖提取率的影响，同时对水提取、超声波提取和微波提取三种提取方法进行了比较，利用葡聚糖凝胶和纤维素柱层析分离技术对多糖进行纯化，并运用薄层色谱和气相色谱考察了其单糖组成，采用高通量药物筛选模型对多糖的抗肿瘤活性进行了探讨，试验结果如下： 1 建立了苯酚-硫酸法测定竹叶多糖含量的方法。在波长为490nm，以无水葡萄糖为对照品，20～100μg／ml范围内，浓度和吸光度呈良好的线性关系，回归方程为Y=7.275X+0.0004，相关系数R2为0.9989。 2 优化了竹叶多糖提取工艺参数，首次将超声波和微波技术应用到竹叶多糖的提取工艺，得到其最佳提取条件，水提最佳浸提参数为：温度80℃，时间90min，固液比1∶25，浸提3次，多糖得率为0.661％；超声波提取最佳浸提参数为：温度70℃，时间20min，固液比1∶20，浸提3次，多糖得率为0.708％；微波提取最佳浸提参数为：微波功率500W，固液比1∶15，时间2min，浸提3次，多糖得率为0.655％。 3 竹叶粗多糖经Sevag法脱蛋白，DEAE-纤维素柱层析，以浓度为0、0.05M、0.1M、0.3M、0.5M的NaCl溶液梯度洗脱，得到四个竹叶多糖（Bamboo polysaccharide，BPS）：BPS1、BPS2、BPS3、BPS4，其得率分别为46.45％、4.31％、1.62％、0.53％；BPS1再经DEAE-纤维素、Sephadex G-75凝胶柱层析得到BPS11；用Sephadex G-100柱层析鉴定了它们的纯度，用HPTLC和GC测定了它们的单糖组成为：鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=2.91：9.27：4.42：6.38：25.59：9.44。 4 运用高通量药物筛选模型对竹叶多糖的抗肿瘤活性进行了考察，结果表明，在竹叶多糖剂量为10μg／ml时，对THP-1（单核细胞白血病细胞株）肿瘤细胞有抑制作用。