广西青钱柳降血糖有效成分及作用机制的研究

目的本研究通过提取分离青钱柳多糖成分（Cyclocarya paliurus polysaccharide,CP）,观察CP对实验性糖尿病小鼠的降糖作用,并初步探讨其降糖机制,为开发一种有效而低毒的降糖药物提供理论依据。 方法通过水提醇沉淀的方法提取CP,用Molish反应及Fehling反应来鉴定CP。采用四氧嘧啶（alloxan,ALX）致糖尿病小鼠模型方法研究CP降低高血糖的作用。100只清洁级昆明小鼠随机抽取12只为正常对照组,尾静脉注射等渗盐水(0.1ml·10g-1);余小鼠注射ALX(70mg·kg-1),3天后测定其空腹血糖值,将>11.1mmol·L-1的小鼠作为糖尿病模型小鼠。然后将糖尿病模型小鼠随机分成5组分别为:模型组、二甲双胍组(Dimethyldiguanide,Dim;250mg·kg-1·d-1)、CP低、中、高剂量组(CP300mg、450mg和600mg·kg-1)。给予CP及阳性对照药物,每天上午一次,连续15天。实验期间观察并记录小鼠饮食、饮水、体重、大小便等一般情况,并在相应时间内尾静脉采血测定各组小鼠的空腹血糖（FBG）、体重;给药结束后,取胰腺组织进行HE染色观察。采用组织匀浆MDA比色法和Fenton反应,进行青钱柳多糖的抗氧化及脂质过氧化作用的研究,探讨青钱柳多糖降血糖的作用机制。 结果1、青钱柳叶经水提醇沉淀的方法提取得到土黄色固体;用Molish及Fehling反应对该样品进行鉴定,反应结果均为阳性证实该样品为CP。CP能够拮抗ALX诱导的小鼠高血糖,给药15天后,各给药组血糖与模型组相比,均有明显降低（P<0.05）。CP对正常小鼠血糖及体重不产生影响。给药完毕后,剖取胰腺HE染色观察发现,CP对四氧嘧啶导致的胰岛细胞损伤,具有一定的保护或修复作用。模型组胰岛细胞结构较正常胰岛组织可见到明显的破坏,各给药组小鼠的胰岛细胞形态及结构比较接近正常组的,坏死细胞及炎细胞出现的较少,相对于模型组的损伤较轻。 2、通过对CP抗氧化方面的研究发现,它具有较强的抗脂质过氧化及清除羟自由基的作用。CP对小鼠肝组织自发性MDA的有较强的抑制作用,抑制率最高达40.4%;CP还可明显减轻由CCl4、H2O2、Fe2+-VitC等自由基诱导的肝脏脂质过氧化作用,最高抑制率分别可达47.14%、50.07%、41.01%。在以上反应中,当CP浓度小于2 mg·ml-1时,随着CP剂量的增高,抑制率也相应的增高,呈剂量依耐性;当浓度达到4mg·ml-1时,抑制率并没有持续增高但仍处于较高水平。CP具有很强的清除·OH能力,其IC50为0.33 mg·ml-1。随着药物浓度的增加,它对·OH自由基的清除率也不断增大,但增大到了一定浓度,再增加其浓度,清除率反而有所降低。 结论CP对四氧嘧啶性糖尿病小鼠有降血糖,维持体重的作用。其降糖机制可能与CP具有保护胰岛组织及清除自由基及抗脂质过氧化作用有关。