一、目的
应用代谢物组学的方法研究文拉法辛对抑郁症模型大鼠内源性神经递质（5-HT、NE、DA）代谢变化的影响,从代谢物组的体内变化规律探明抗抑郁药文拉法辛可能的药理作用机制。
二、方法
1.慢性应激抑郁模型制备及评价
用Open-Field法对60只雄性SD大鼠作行为学评定,根据水平运动和垂直运动总得分进行随机区组设计,分为正常对照组、抑郁模型组、盐酸文拉法辛高、中、低剂量组和盐酸氟西汀组共计6组,每组10只。正常对照组大鼠每笼5只,不予任何刺激。其他5组采用分养和慢性轻度不可预见性应激造成抑郁症模型大鼠。造模结束采用Open-Field法和糖水消耗试验进行评价。
2.给药方法和生物样本的采集
给予21天刺激后,正常对照组继续常规饲养,每笼饲养5只,其它各组继续分养,给予不同的预处理,即每日分别灌服生理盐水（2mL,Ⅰ组、Ⅱ组）,低剂量文拉法辛(8 mg·kg-1,Ⅲ组),中剂量文拉法辛(16 mg·kg-1,Ⅳ组),高剂量文拉法辛(32 mg·kg-1,Ⅴ组),氟西汀(2 mg·kg-1,Ⅵ组)。连续灌胃14天后,断头处死大鼠,在冰台上迅速取出全脑置冻存管中,立即投入液氮中冷冻,后放入-80℃冰箱保存待测。
3.生物样本的测定方法
3.1 LC-MS/MS法同时测定脑组织中5-HT、NE和DA的浓度。
3.2 LC-MS/MS法同时测定脑组织中5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA的浓度。
三、结果
1.生物样本测定结果
1.1脑组织中5-HT、NE和DA的浓度测定5-HT、NE和DA分别在4.45～4450 ng·mL-1、4.11～4110 ng·mL-1和4.10～4100 ng·mL-1浓度范围内线性良好（r≥0.999）,最低检测浓度分别为4.45、4.11和4.10ng·mL-1。加样回收率分别为80.17%～100.02%、70.00%～83.44%和80.12%～86.30%,标准液的日内和日间RSD均小于4.66%,匀浆液样品的日内和日间RSD均小于6.30%。
1.2脑组织中5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA的浓度测定5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA在12.5～1000 ng·mL-1浓度范围内线性良好（r≥0.998）,最低检测浓度为12.5 ng·mL-1。加样回收率分别为90.98%～95.71%、93.93%～106.81%、95.13%～108.36%和86.62%～97.42%,标准液的日内和日间RSD均小于8.45%,匀浆液样品的日内和日间RSD均小于8.33%。
2.文拉法辛对大鼠脑内神经递质的影响
服药后与模型组（Ⅱ组）相比,文拉法辛低剂量组（Ⅲ组）神经递质含量及比值无显著性差异。文拉法辛中剂量组（Ⅳ组）5-HT与NE的含量显著升高（P＜0.01）,5-HIAA的含量明显下降（P＜0.05）;DA的含量升高,MHPG、DOPAC和HVA的含量下降,但无统计学意义;5-HIAA/5-HT与MHPG/NE显著降低（P＜0.01）;（DOPAC+HVA）/DA与NE/5-HT有下降趋势,但无统计学意义。文拉法辛高剂量组（Ⅴ组）5-HT与5-HIAA的含量均明显升高（P＜0.05）;NE的含量升高,DA、MHPG、DOPAC和HVA的含量下降,但均无统计学差异;MHPG/NE显著降低（P＜0.01）;5-HIAA/5-HT与NE/5-HT有下降趋势,但无统计学意义。氟西汀组（Ⅵ组）除5-HIAA/5-HT显著降低（P＜0.01）外,其他神经递质含量和比值均无显著性差异。
四、结论
1.抑郁症模型大鼠灌服文拉法辛后,中、高剂量的文拉法辛能显著增加脑内5-HT和NE的含量,并能使DA的含量也有一定程度升高,且均比氟西汀引起的神经递质改变要明显。
2.文拉法辛可以从多方面来调节中枢单胺类神经递质之间的关系,通过抑制5-HT、NE再摄取,同时降低二者的代谢,纠正递质代谢紊乱,提高其含量,并能协调5-HT、NE及DA间的平衡,以达到抗抑郁的功能。
