目的：通过研究连花清瘟胶囊拆方(麻杏石甘汤和银翘散加减方)抗流感病毒的药理作用特点,探讨连花清瘟胶囊的组方特点及药理作用。方法：1)以奥司他韦为阳性对照药,细胞病变法(CPE)和MTT法体外检测连花清瘟胶囊拆方(麻杏石甘汤和银翘散加减方)对流感病毒的调节作用及对细胞的保护作用；2)以GAPDH为内参基因,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)和ELISA法检测流感病毒感染后24小时,药物对炎性细胞因子及趋化因子mRNA水平和蛋白水平的调节作用；3)免疫印迹法(Western blotting)检测流感病毒感染后,药物对相关信号通路NF-KB-p65的调节作用；4)用流感病毒A/PR/8/34(H1N1)标准株滴鼻感染小鼠建立小鼠感染模型,随机分为正常对照组、模型对照组、奥司他韦组(60mg/kg/d),麻杏石甘汤高剂量组(1000mg/kg/d)、中剂量组(500mg/kg/d)、银翘散加减方高剂量组(800mg/kg/d)、中剂量组(400mg/kg/d),观察小鼠的一般情况,如体重变化、活动状态、毛发、食欲等,测定肺指数、肺病毒滴度及肺组织病理。结果：1)CPE和MTT实验结果显示,麻杏石甘汤对不同亚型的人流感及禽流感病毒株(H1N1、 H3N2、H6N2、H9N2、FluB)都有明显的抑制效果,而银翘散加减方体外并未显示直接的抗流感病毒作用；2)qPCR及ELISA实验结果显示,麻杏石甘汤和银翘散加减方都能抑制流感病毒感染后诱导产生的过高的细胞因子及趋化因子(IP-10、IL-6、IL-8、MIG、CCL5、TNF-α等)的表达,对EP-10、IL-6的下调作用更明显,与病毒组比较p<0.001；3)Western blotting实验结果显示,麻杏石甘汤在3～0.38mg/ml时能下调流感病毒感染后诱导的NF-KB-p65的磷酸化表达,并且这种下调作用与药物浓度呈梯度关系,随着药物浓度的降低下调作用逐渐减弱；银翘散加减方在2-0.25mg/ml对NF-KB-p65的磷酸化表达也显示出下调作用；4)麻杏石甘汤高剂量和中剂量组对流感病毒感染后小鼠的肺指数增高均有显著的降低作用(p<0.001)；银翘散加减方中剂量组对流感病毒感染后小鼠的肺指数增高有显著的降低作用(p<0.01),高剂量组对肺指数增高未显示降低作用。结论：连花清瘟胶囊拆方中麻杏石甘汤体外具有直接抗流感病毒及下调流感病毒感染后上升的细胞因子及趋化因子的双重作用,体内对流感病毒感染后小鼠肺损害具有抑制作用,可能的作用机制是麻杏石甘汤抑制了NF-KB-p65信号通路的磷酸化表达,继而抑制了流感病毒的复制及调节宿主免疫应答反应；银翘散加减方体外并未显示直接抗流感病毒作用,但是能够下调流感病毒感染后上升的细胞因子及趋化因子的表达,下调了NF-KB-p65信号通路的磷酸化表达,体内对流感病毒感染后小鼠肺损害具有抑制作用,其作用机制可能是通过抑制NF-KB-p65信号通路的磷酸化表达而抑制炎性因子的过度表达。
