灵芝子实体中三萜类化学成分的分离纯化、结构鉴定及体外抑制肿瘤细胞活性的研究

灵芝Ganoderma lucidum（Curtis: Fr.）P.Karst.是我国最著名的高等药用真菌，作为药物已有2000多年的历史了。研究表明，灵芝三萜是灵芝的主要活性成分之一。据文献报道，灵芝三萜具有抗肿瘤、保肝作用、抑制组胺释放、抑制血管紧张素转化酶等活性。目前，国内外对灵芝三萜类化合物的研究已有不少报道，大部分集中在分离纯化方面，一些研究者对分离纯化出的化合物进行了生物活性的研究；但以药理实验为跟踪手段系统分离纯化灵芝中的三萜类化合物的研究仍很少见。 本研究将灵芝子实体先经95％乙醇浸提后，然后用氯仿萃取，得到中性提取物，再经碱提酸中和处理，用氯仿萃取，得到酸性提取物。中性和酸性提取物，经硅胶柱层析、MCI柱层析、ODS柱层析及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化，将中性和酸性提取物进一步纯化为不同的组分，从中共分到6个化合物。 从中性提取物中分离纯化出4个化合物，其中3个根据1H-NMR和13C-NMR谱图，确定了它们的结构，化合物Ⅰmethyl7β-hydroxy-3，11，15，23-tetraoxo-5α-lanost-8-en-26-oate（methyl ganoderate D）；化合物Ⅱ为methyl 12β-acetoxy-3，7，11，15-tetraoxo-5α-lanost-8-en-24-oate（methyl lucidenate D）；化合物Ⅲ为7β-hydroxy-4，4，14α-trimethyl-3，11，15-trioxo-5α-lanost-8-en-24-oic acid（lucidenic acid A）。在这3个化合物中，化合物Ⅰ和化合物Ⅱ为新的天然产物，均为首次从灵芝属的子实体中直接分离得到的化合物，化合物Ⅲ为一已知化合物。从酸性提取物中分到2个化合物，采用HPLC方法检测其纯度，表明化合物Ⅴ的纯度为98.00％，化合物Ⅵ的纯度为99.54％。 本研究将分离纯化各个阶段的组分进行了活性跟踪，通过研究灵芝子实体中三萜类化合物对肿瘤细胞增殖的抑制作用发现，分离出的76个组分，大部分在体外对L1210肿瘤细胞具有较强的抑制活性，少数样品对L1210的抑制作用不明显。当样品浓度在200μg／mL时，除极个别的组分如A12M5的抑制率较低，仅30.69％外，其余组分的抑制作用均十分显著，绝大部分组分的抑制率高于80％。当样品浓度在50μg／mL时，各组分对L1210的抑制作用与在200μg／mL时的抑制作用基本相当，绝大部分的组分对L1210的抑制率超过60％，有些甚至高于80％，组分N7M1、N7M4、N8、N8M1、N8M2和A12M4-A12M7对L1210的抑制作用较弱。样品浓度在10μg／mL时，大部分组分对L1210仍有较强的抑制活性，组分N1、N6、N7、N7M6、N7M9、A8、A10、A10s1、A10s2、A10s4-A10s8、A11s2、A11s4、A11s8、A11s9、A12N12、A13s3-A13s6对L1210均有显著的抑制作用，抑制率高于60％，因此，灵芝三萜类化学成分在体外对肿瘤细胞的生长有较强的抑制作用。