人参三醇类皂苷生物转化的研究

本论文主要研究以人参中含量高的三醇类皂苷Re为基础,经真菌sp.39产生酶转化生成人参皂苷Rg1,以及Microbacterium sp.GS514菌产生酶转化人参皂Re、Rgi为活性高的人参皂苷Rg2和Rh1等,并分离制备了单体皂苷Rg1、Rg2,对R型和S型Rg2进行了拆分。 本论文一方面对能转化生成人参皂苷Rg1的酶的性质进行了研究,对比6种真菌产酶对转化生成人参皂苷Rg1的活性,选取活性最高的真菌sp.39。该菌产生酶经过DEAE-Cellulose离子交换层析柱分离纯化,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定为单带,蛋白质亚基分子量56kDa。选取了最适的酶反应条件,最佳酶反应底物浓度1.0%,最适反应温度30℃,最适pH6.0。 另一方面本论文采用弱酸水解法和酶转化法制备人参皂苷Rg2,弱酸水解人参皂苷Re于65℃放置3h,反应后生成Rg2、Rg4和Rh1等；50g浓度为2%的人参皂苷Re与Microbacterium sp.GS514菌产生酶在40。C下反应24h,可制备活性高的人参皂苷Rg2和Rh1,产物经稀释上AB-8大孔吸附树脂除杂、粗分离,收集75%乙醇洗脱液,蒸干后得混合皂苷37g,采用硅胶柱法分离Rg2,流动相为氯仿：甲醇=8.5：1.5,分离得5.07g Rg2,得率为13.7%。 本实验所用的人参皂苷Re是通过硅胶柱分离实验室提供人参叶三醇皂苷而获得的。将分离得到的较纯单体皂苷Re采用结晶法提纯,高效液相色谱检测纯度,20g Re结晶得到纯度99%Re9.736g。 根据R型和S型Rg2两种构型的溶解度差异,取2g Rg2应用重结晶法进行拆分。S型Rg2溶解度比R型小,在饱和溶液中首先析出,R型和S型Rg2在第2次结晶得到拆分,获得S型Rg20.62g,纯度为95.3%。第3次结晶,主要为R型Rg2,约为0.3g,纯度89%。