骨髓间充质干细胞构建小口径组织工程化血管的实验研究

第一部分 成人骨髓间充质干细胞的分离和鉴定 目的 本实验拟通过体外细胞培养的方法，将间充质干细胞自骨髓血中分离出来，并加以纯化、鉴定，进一步在体外的培养条件下研究其增殖及生长的特性，从而探讨为组织工程化血管研究提供种子细胞的可能性。 方法 收集成人骨髓血，采用密度梯度离心和贴壁生长的方式，提取单个核细胞进行体外培养；收集第2～3代（P2～P3）细胞行流式细胞仪检测细胞抗原表达（CD34、CD45、CD11a，CD14、KDR、CD105、HLADR）；采用细胞计数的方法，绘制原代培养和传代培养细胞的生长曲线。 结果 通过密度梯度离心和贴壁生长的方法，可以获取具有一定形态特点、贴壁生长、增殖活跃的骨髓间充质干细胞；该细胞表达KDR、CD105，但不表达CD34、CD45、CD11a，CD14、HLADR等；原代培养曲线显示，第2～6d为生长潜伏期，第7～8d开始，贴壁细胞已形成大小不一的多个细胞克隆，第8～10d进入对数增长期；第12～14d进入个平台期；传代培养的细胞多于P10后开始出现衰老的现象，传代培养的潜伏期为24～48h，传代培养的对数增长期为4～6d，接种后8～9d，细胞的增殖、生长逐渐缓慢，进入平台期。 结论 1．利用密度梯度离心和贴壁的方法可以获取较高纯度的BMMSCs；2．该BMMSCs具有大量增殖的功能，可满足组织工程种子细胞的需要；3．BMMSCs表达CD105、KDR，不表达HLA-DR、CD34、CD45、CD11a、CD14。 第二部 分骨髓间充质干细胞定向诱导为血管平滑肌样细胞、内皮样 细胞的实验研究 目的 本实验通过诱导动物骨髓间充质干细胞向血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞分化，通过形态学和相关抗原的鉴定，探讨其作为血管壁种子细胞的可行性。