草鱼血清对嗜水气单胞菌天然抗性成分的研究

嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）的感染严重影响养殖 业的发展，鲤科鱼所受损失最严重，但鲤科鱼中的草鱼对该病不易感， 原因何在，值得探讨。本试验从Ah的毒力因子胞外蛋白酶（ECPase） 和外膜蛋白（OMP）着手，研究了草鱼对Ah天然抗性产生的物质基础。 在建立间接原位消化试验方法的基础上，证明草鱼血清中具有抗 ECPase的成分；定量抑制试验表明，40μl草鱼血清能抑制85％工作浓 度的酶活性。经（NH4）2SO4沉淀、Sephadex G100、DEAE-Sephadex A50 层析，对抗性成分进行纯化，间接原位消化法及酪蛋白消化抑制法鉴定， 纯化物具有抗ECPase活性。经SDS-PAGE确定其分子量为80，000。等 电聚焦分析确定其等电点为5.2，在pH5-8抗性成分较稳定，胰蛋白酶 抑制试验表明，50μl抗性成分能抑制100μg胰酶的活性，其在整个草 鱼血清中占总蛋白的23.57％，将草鱼血清中存在的抗ECPase成分定名 为草鱼人α巨球蛋白同源物（αMh-gc）。但免疫电泳分析显示，血清 中提取的αMh-gc与抗人α2M抗体之间无免疫交叉反应。 草鱼血清的各成分经Dot-ELISA阻断试验分析表明，血清中具有 β迁移率的成分能与OMP结合。体表粘液及肠粘液中也发现有相似的 抗OMP成分，SDS-PAGE、免疫转印确定血清中抗OMP成分分子量为 66，000，取名为草鱼抗膜蛋白（AntiMP-gc）