体外释放组胺肥大细胞模型在过敏原分析中的应用

[目的]用本实验室建立的组胺体外释放肥大细胞模型,将过敏原的不同组分置酶标板孔中诱发致敏肥大细胞释放组胺,通过组胺释放的量,分析过敏原中不同过敏原组分的致敏差异性。该方法可作为体外分析过敏原不同组分的致敏性强弱、确定过敏原诊断以及抗体芯片的必需组分和评价过敏原疫苗效果。 [方法]虾粗制过敏原与尘螨粗制过敏原分别免疫C57/BL6小鼠,收集小鼠腹腔致敏肥大细胞(PMC),分别用虾、尘螨中不同过敏组分诱导PMC释放组胺,分别用组胺试剂盒、荧光法检测其释放水平,并进行比较。 [结果]从虾蛋白中纯化出80KD、36KD和21KD等三种虾致敏蛋白,分别用这三种致敏蛋白诱导PMC释放组胺,80KD、36KD诱导释放的组胺最高,21KD蛋白次之,表明80KD、36KD蛋白是虾致敏蛋白中的主要过敏原;虾致敏蛋白混合诱导明显比单一组分诱导释放组胺多,并低于致敏蛋白单一诱导的组胺量的叠加,表明虾蛋白组分在诱导释放组胺中存在协同效应。尘螨致敏蛋白中,Der f2致敏性强于Der f1,说明Der f2是尘螨致敏蛋白中的主要致敏原,尘螨混合诱导PMC释放组胺时,随着Der f2比例的升高组胺释放量也升高。荧光法测体外释放组胺量,灵敏、稳定、客观有效。 [结论]体外肥大细胞组胺释放模型能够客观反映虾过敏原和尘螨过敏原的不同过敏原组分释放组胺的差异性;检测组胺释放量比检测血清中IgE或其他物质更能反映不同过敏原组分的致敏强弱;体外检测过敏原模型比体内检测过敏原模型更具有可行性、可操作性和可推广性。该模型可用于过敏原的体外诊断、疑难过敏症的病因分析和过敏原检测或治疗性疫苗的评价,特别是为食品过敏原的标准化研究等提供新技术。