红枣中环磷酸腺苷提取与纯化工艺研究

本研究以新疆红枣为试验材料，研究的主要内容为：建立一套快速、准确、灵敏的分析红枣中cAMP的UPLC方法；超声波辅助高效提取cAMP方法研究；提取物高效酶解与cAMP释放技术研究；cAMP分离纯化工艺方法的研究。结果如下： 1.大枣环磷酸腺苷（cAMP）超高效液相色谱（UPLC）的色谱条件为：色谱柱:pH2-11，ZORBAXExtend C182.1×100mm1.8-Micron Rapid Resolution HD2.1×100mm1.8-Micron，流动相：V (甲醇):V(0.1mol/L磷酸二氢钾)=20:80；流速1.0mL/min，柱温25℃，进样量10uL，最佳检测波长258nm。实验结果表明：标准曲线线性良好，加标回收率为100.24%，标准偏差为0.92%。该方法简便、灵敏，重现性好，能够快速测定大枣中cAMP的含量。 2.建立一种基于超声波辅助提取红枣中环磷酸腺苷（cAMP）的方法。以料液比、超声波功率、处理时间、超声处理方式为提取参数，按照单因素实验确定参数变化水平区间，cAMP提取率为响应值，采用中心组合设计的响应面分析法优化参数，结果表明，cAMP最佳提取工艺参数为：料液比1:15.5、超声波功率314W、处理时间11.7min、超声处理方式1.08min，cAMP提取量为502.2ug/g，提取率为96.80%。 3.大枣提取液中多糖的存在对cAMP提取率存在较大的影响。通过果胶酶的水解作用，在120min附近cAMP提取率达到峰值，pH变化区间为pH4.24-pH4.18，呈弱酸性稳定环境。 4.利用AB-8型大孔吸附树脂除去大枣提取液中色素、多糖等杂质，优化参数为：上样液最佳pH4、浓度为20ug/mL、上样流速为2mL/min，上样液最大体积为300mL；采用40%乙醇溶液作为洗脱剂，洗脱剂流速2mL/min，洗脱剂最大用量为160mL，收集洗脱液接近为无色。 5.利用D-290型大孔吸附树脂对cAMP进行分离纯化。试验中选取上样液浓度、上样液流速、洗脱液浓度、洗脱液流速4个单因素进行L934的正交试验。确定最佳工艺参数为：上样液浓度400ug/mL，上样液流速2.5BV/h，洗脱液采用浓度为（0.1mol/L）HCl-（0.4mol/L）NH4Cl溶液，洗脱液流速2.5BV/h。在此优化条件下，cAMP纯化率为42.29%，cAMP含量为212.38ug/g。