本课题主要目的是探讨利用高速逆流色谱分离纯化,高效液相分析分离物,以建立一种污染少的、高回收的、高效率的技术流程。对叶下珠的一般药理作用进行研究,以期为叶下珠的开发应用进一步提供理论依据。课题的主要内容分为以下几个部分:
1.HSCCC分离纯化叶下珠的化学成分
目的:利用高速逆流色谱分离纯化叶下珠的化学成分。方法:通过薄层色谱法观察目标物在两相间的分配,初选HSCCC溶剂系统,再通过分析型HSCCC选定溶剂系统:氯仿-甲醇-水,最后通过调整速度进行制备性分离。结果:在分析型HSCCC上,进样150mg乙酸乙酯部分萃取物,溶剂系统氯仿-甲醇-水（4:3:2）,一次分离到2mg纯度为80.7%的目标物1。进样150mg水部分萃取物,溶剂系统氯仿-甲醇-水（4:3.5:2）,一次分离到1.8mg纯度为90.2%的目标物2。目标物1和目标物2都能在制备型HSCCC上分离。结论:运用该溶剂系统从叶下珠的乙酸乙酯和水萃取部分一次性分离得到预想的目标物。
2.叶下珠提取物的体外抑菌试验
目的:研究叶下珠提取物的体外抑菌作用和抑菌机制。方法:以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为对象菌,采用打孔法测定叶下珠水提职物、75%乙醇提取物、95%乙醇提取物及95%乙醇提取物各部分萃取物的抑菌圈直径,采用稀释法测定叶下珠水提取物、75%乙醇提取物、95%乙醇提取物的最低抑菌浓度。以大肠杆菌为指示菌,绘制叶下珠水提取物对大肠杆菌作用的生长曲线,应用扫描电镜方法观察叶下珠水提取物对大肠杆菌形态结构的影响。结果:叶下珠提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有一定的抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度都是31.25mg/mL,对大肠杆菌的最低抑菌浓度都是62.5mg/mL。叶下珠水提取物能够抑制大肠杆菌对数生长期的分裂。扫描电镜观察,菌体无饱满感、变形、有的菌体破裂。结论:叶下珠提取物具有明显的抑菌抗菌作用。
3.叶下珠提取物体外抗氧化作用
目的:研究叶下珠提取物体外抗氧化作用。方法:应用叶下珠水提取物、75%乙醇提取物、95%乙醇提取物体外对羟自由基（·OH）、超氧阴离子（O2·-）的清除和抑制H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血性等方法来研究叶下珠的抗氧化活性。结果:当浓度为1mg/mL时,叶下珠水提取物对羟自由基（·OH）、超氧阴离子（O2·-）的清除和抑制H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血性最强,为90.9%、62.5%、20.5%;75%乙醇提取物是35.6%、40.2%、16.7%;95%乙醇提取物是48.4%、21.3%、17.8%。结论:叶下珠提取物具有明显的体外抗氧化作用。
4.叶下珠提取物体外保肝作用
目的:研究叶下珠提取物体外保肝作用。方法:采用体外培养法获取罗非鱼的原代肝细胞,用CCl4对肝细胞建立体外损伤模型,研究叶下珠水提取物、75%乙醇提取物、95%乙醇提取物对丙氨酸转氨酶（Alanine aminitransperase,ALT）、天冬氨酸转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）活力的影响。结果:加药组丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性显著低于损伤组,差异极显著（p＜0.01）。结论:叶下珠提取物具有明显的体外保肝作用。
