海螵蛸对吲哚美辛诱导的大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用研究

NSAIDs作为一种已有百余年使用历史的传统解热镇痛和抗炎药物,因其确定的抗炎、止痛、退热、抗血小板聚集作用,已经被广泛应用于临床各学科。而且随着适应症的不断延伸,其使用量不断上升。但是NSAIDs最重要的胃肠道副反应,如出血糜烂性胃炎、消化性溃疡甚至出血等严重限制了临床应用。 海螵蛸作为一种传统的中药材料,历史悠久,应用广泛,可用于治疗胃酸过多、胃溃疡以及止血等。临床研究已显示,海螵蛸治疗消化性溃疡有效,但其治疗的作用机理还需研究,且对NSAIDs所致胃黏膜损伤的防治疗效尚未见研究。 本研究将通过制备吲哚美辛致大鼠急性胃粘膜损伤模型,采用现代药理学手段,按不同剂量的海螵蛸对模型大鼠进行保护性干预,比较各组干预对吲哚美辛诱导的大鼠急性胃黏膜损伤的保护效果,并对其可能的机制进行探讨。 材料和方法 1.实验动物：采用清洁级、健康、性成熟、雄性SD大鼠60只(由浙江省药品检验所实验动物中心提供),体重150±15g。 2.动物分组和给药：大鼠随机分为6组,每组10只,禁食不禁水24h后,正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,各药物治疗组分别以奥美拉唑4mg/kg、海螵蛸：高剂量组(3000mg/kg)、中剂量组(1500mg/kg)和低剂量组(750mg/kg)灌胃,半小时后除正常对照组外均再予吲哚美辛40mg/kg灌胃。所有灌胃容量均为Iml/100g大鼠体重。药物剂量按《药品注册管理办法》(局令第28号)要求设计并依照动物与人体间的等效剂量换算。 3.检测指标和方法 3.1胃标本大体损伤指数：观察胃标本大体情况并用游标卡尺测量损伤长宽径,按Guth标准详细记分。 3.2胃粘膜病理炎症积分：胃组织用10%福尔马林固定,常规切片,HE染色,按Rauws分级标准评分,应用总分的变化来衡量胃黏膜炎症的程度。 3.3血EGF和PGE2:按试剂盒说明书要求,以酶联免疫法测定。 3.4组织PGE2、MDA含量和SOD活性：标本先分别以酶联免疫、TBA及WST-1法测出组织PGE、MDA浓度和SOD抑制率,再除以用BCA法测出的蛋白浓度,得出组织PGE、MDA含量和SOD活性。 结果 1.胃黏膜大体观察：肉眼观察发现,正常对照组大鼠胃黏膜光滑,色泽红润,黏膜皱襞纹理清晰；模型组大鼠胃腔内均见血性积液,黏膜表面附有大量血痂,用冰生理盐水冲洗后见粘膜充血水肿明显,弥漫点线状溃疡病灶；奥美拉唑组和海螵蛸高、中剂量组仅见少量点状糜烂,黏膜轻度充血；海螵蛸低剂量组可见胃黏膜充血和点线状溃疡病灶。 2.损伤指数：模型组损伤指数为(31.50±10.60),奥美拉唑组和海螵蛸高、中剂量组损伤指数分别为(17.90±3.50)、(18.30±6.95)和(20.00±7.13),均较模型组下降非常显著(p<0.01),海螵蛸低剂量组损伤指数为(24.50±6.79),较模型组也下降显著(p<0.05)。 3.炎症积分：模型组大鼠胃黏膜炎症积分(4.70±1.16)较正常对照组(1.70±0.82)明显升高(p<0.01)。奥美拉唑组及海螵蛸高剂量组的胃黏膜炎症积分分别为(3.20±1.32)和(3.30±1.42),均较模型组(4.70±1.16)下降非常显著(p<0.01)；海螵蛸中剂量组的胃黏膜炎症积分(3.40±1.08)较模型组下降显著(p<0.05)；海螵蛸低剂量组的炎症积分(3.90±1.00)较模型组有降低,但差异无统计学意义(p>0.05)。 4.血清EGF水平：与正常对照组(90.47±18.97pg/ml)比较,模型组大鼠血中EGF(76.21±11.58pg/ml)水平下降(p<0.05)。与模型组(76.21±11.58g/ml)比较,奥美拉唑组大鼠血EGF水平(92.31±13.79pg/ml)升高(p<0.05),海螵蛸高、中、低剂量组大鼠血EGF水平(111.42±13.33pg/ml；97.01±14.49pg/ml;117.83±15.36pg/ml)升高非常显著(p<0.01)。 5.血清PGE2水平：模型组大鼠血中PGE2水平(100.63±32.78pg/ml)较正常对照组(111.00±16.11pg/ml)比较有所下降,但差异无统计学意义(p>0.05)。奥美拉唑组和海螵蛸各剂量组大鼠血PGE2水平(139.60±30.67pg/ml;144.61±20.8pg/ml;136.86±21.70pg/ml；163.30±34.58pg/ml)均较模型组(100.63士32.78pg/ml)升高非常显著(p<0.01)。 6.组织PGE2水平：模型组大鼠组织中PGE2水平(12.11±2.10pg/mgprol)较正常对照组(16.00±3.78pg/mgprol)显著下降(p<0.01)。奥美拉唑组和海螵蛸高、中剂量组大鼠组织PGE2水平(15.74±2.50pg/mgprol;15.94±3.56pg/mgprol;16.77±2.79pg/mgprol)均较模型组(12.11±2.10pg/mgprol)升高非常显著(p<0.01),海螵蛸低剂量组(15.45±2.94pg/mgprol)较模型组也升高显著(p<0.05)。 7.组织MDA含量：模型组大鼠胃组织中MDA含量(0.32±0.06nmol/mgprol)较正常对照组(0.22±0.04nmol/mgprol)升高非常显著(p<0.01)。奥美拉唑组和海螵蛸各剂量组大鼠组织MDA含量(0.21±0.03nmol/mgprol；0.26±0.03nmol/mgprol;0.25±0.05nmol/mgprol;0.25±0.05nmol/mgprol)均较模型组(0.32±0.06nmol/mgprol)降低非常显著(p<0.01))。 8.组织SOD活性：模型组大鼠组织中SOD活性(1.50±0.20U/mgprol)较正常对照组(2.05±0.29U/mgprol)降低非常显著(p<0.01)。奥美拉唑组和海螵蛸各剂量组大鼠组织SOD活性均有升高,但仅有海螵蛸高剂量组(2.5±0.38U/mgprol)与模型组间的差异有非常显著的统计学意义(p<0.01)。 结论 海螵蛸能有效地预防吲哚美辛诱导的大鼠急性胃黏膜损伤,其疗效可能与刺激细胞因子EGF的分泌、增加PGE2的合成和分泌及防止脂质过氧化和激活清除自由基的酶有关。