鸡腿蘑是一种药食两用真菌。鸡腿蘑发酵液具有降血糖功能,其多糖具有抗癌、抗肿瘤、改善免疫系统功能、降血糖等功效。为了进一步强化其降血糖及对糖尿病的防治效果,本论文以添加药食两用中药的培养基进行鸡腿蘑深层发酵,研究了中药对鸡腿蘑发酵的影响及添加苦瓜发酵的鸡腿蘑活性成分的变化,并评价了添加中药的鸡腿蘑发酵液对α-葡萄糖苷酶和体外非酶糖基化的抑制作用,同时探讨了活性成分的生物活性。
本文研究了中药固体粉末对鸡腿蘑发酵及其活性的影响。绞股蓝、苦荞、魔芋、百合、人参、丹参、苦瓜在1%的添加量下对鸡腿蘑的生长没有抑制作用,而且对胞外粗多糖的生产还有不同程度的促进作用,黄芪、玉竹严重抑制鸡腿蘑的生长。通过梯度添加初步确定人参的最适添加为1.5%,绞股蓝、苦荞、魔芋、百合、丹参、苦瓜的最适添加量均为0.5%。在上述添加量下,苦瓜的鸡腿蘑发酵液对α-葡萄糖苷酶和体外非酶糖基化的抑制活性提高显著。
本文进一步研究了苦瓜对鸡腿蘑发酵的影响。经过优化,添加苦瓜的鸡腿蘑发酵最适起始pH=6.3,最适添加量为0.75%,发酵液对体外非糖基化的抑制率提高到(96.9±0.3)%。30L发酵罐扩大试验,发酵72h,生物量可达0.8680g/100mL,胞外粗多糖产量可达0.6129 g/100mL。
培养基中添加苦瓜后,鸡腿蘑发酵产生的胞外多糖主要组分没有变化,但胞外多糖的产量及其主要组分的相对含量发生了变化。经过DEAE离子交换和Superdex 200凝胶柱分离,所得的2个主要的多糖组分的分子量为CMP-ⅠA:23455Da,CMP-ⅡB:20267Da。经分析,多糖CMP-ⅠA由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为4︰16︰4︰1︰65,其主链结构可能为-β-D-Gal(1→6)-,还有β-D-木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖可能位于侧链,也可能杂合于主链中,此外,侧链中可能还存在乙酰基团。
本文采用AB-8型大孔树脂对发酵液作了进一步分离,得到抑制剂EC。胞外多糖和EC对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度分别约为2mg/mL和1.5mg/mL;胞外多糖属于竞争性抑制剂,EC属于非竞争性抑制剂,胞外多糖和EC的Ki值分别为1.14mg/mL和1.20mg/mL。胞外多糖和EC对体外非酶糖基化的半抑制剂量分别约为6mg/mL和0.7mg/mL。
