注射用雌二醇生物可降解缓释微球的研究

本文以难溶性药物雌二醇（E2）为模型药物，以四种不同类型的聚乳酸（PLA）或乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为载体，研究制备了注射用生物可降解缓释微球制剂，并对它们的体内外释药行为及释药机理进行了较为深入的探讨。 在微球制备方法的研究中，分别采用了乳化-有机溶剂萃取法、乳化-混合有机溶剂萃取法以及乳化-有机溶剂挥发法等制备方法，以微球形态、粒径及其分布、微球载药量、药物包封率、微球收率等作为含药微球的质量评价指标，对结果进行了单因素方差分析（ANOVA），以判断各种因素对实验结果的影响；在此基础上，进一步利用Turkey氏多重区间检验（简称T方法）对各因素水平进行两两间多重比较，判断因素的各个水平之间的差异。然后采用主成分分析方法对单因素标准化实验结果综合分析，优选处方并制备出各项指标性质优良的微球制剂。对比不同制备方法的实验结果表明，制备方法对微球内部结构的影响很大：乳化-有机溶剂挥发法制备的微球球形态很好，微球圆整，内部疏松多孔，呈“蜂窝状”；乳化-有机溶剂萃取法制备的微球内部结构中空，外有一层较厚外壳，呈“空心球状”，但部分微球表面存在一定的缺陷。当加入一定比例的四氢呋喃采用乳化-混合有机溶剂萃取法制备微球并增加微球载药量时，微球形态很圆整，但微球表面有药物结晶析出。 在微球的体外释药研究中，由于国内外目前尚无统一或公认的方法，所以分别采取了不同的释药方法进行释药研究，并对释药结果和释药方法进行了综合评价。在本实验中，首先对常用的透析释药法进行了系统研究：建立模型并进行数学公式推导，测定游离药物在透析膜中的渗透常数K值，然后进行模型拟合，得出药物释放动力学并求算出释药速率常数km（或km）。其次，在制样与分离技术的基础上，建立了直接释药法，以含有不同浓度的羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）的磷酸盐缓沖液（pH7.4）作为释放介质，进行微球直接释药研究。通过对释药曲线进行模型拟合，判定各相的释药机理，并计算得到各处方制剂的初始突释释药份数α、降解控释释药速率常数k’以及最大药物释放速率所对应时间Tmax。实验证明，本文所建立的这种直接释药法是注射用难溶性药物雌二醇微球制剂进行体外释放研究的优选方法，具有良好的体内药物释放动力学的预测性。本文直接释药法的建立在国际上尚具有创新意义。最后，进行了微球体外加速释药法的研究。结果表明，以不同浓度氢氧化钠水溶液（37℃）作为释放介质进行加速释药时，通过引进时间比例因子可以对以降解为主要释药机理的真实释药进行预测，能够快速分析处方和工艺的变化，并能对不同的释药机理做出迅速的反应。这种以释药机理为基础的缓释微球体外加速释药法的探讨在国内尚未见相关报导。同时，稳定性实验结果表明，在低温下（4-8℃）且保持密闭干燥状态贮存时微球制剂稳定。 沈阳药科大学博卜学位论文 摘要 在卵巢去势大鼠体内的药物动力学和药效学研究中，首先通过尾静脉注射雌二醇溶 液，计算得到了基本的药物动力学参数，然后分别对三种具有不同释药机制或释药速度 的微球制剂进行了深入的研究。采用放射免疫测定法（RIA）测定体内血清药物浓度， 并采用HPLC法测定微球释药后注射部位肌肉中残留药物量，同时采用敏感且精确的阴 道涂片方法和阴道开口试验进行了药效学研究。实验结果表明，以乳化一有机溶剂萃取 法制备的EZ一PLGAS。ZH一MS微球制剂符合预定的制备21天缓释微球制剂的目标。 本文根据Wagner-Nelson方程，对微球制剂进行了体内外相关性的研究。结果表明， 对于以降解释药为主的EZ一PLGA503H一MS和EZ一PLGA502H一MS微球，当以1%HP一p一cD一 PBS（P H74）为介质进行体外直接释药法释药时，可以建立良好的体内外相关性;而对 于以扩散释药为主的EZ一PLGA502H一14Inl/min一MS微球制剂，当以PBS（pH7.4）为介质进行 体外透析释药法释药时，可以建立良好的体内外相关性。同时，对于肌肉注射制剂在体 外研究中释放条件的选择给予了一定的阐述。 在微球生物相容性研究中，对注射部位进行了组织切片，并采用显微镜进行病理观 察，同时进行了空白对照实验。结果表明，微球注射剂具有良好的生物相容性。 在微球生物降解性质研究中，主要采用差示扫描量热法（DSC）测定PLA/P LGA微球 在降解过程中热学性能的改变，采用凝胶渗透色谱（GPC）测定微球降解前后PL刀PLGA 分子量的变化，而用失重法表征微球溶蚀情况。实验样品分别为采用不同方法制备的空 白微球和含药微球，降解时采用不同的体外释药方法条件，进行平行对比实验。结果表 明，本体溶蚀机理是PLA和PLGA的主要降解途径，由于酷键无规水解而引起分子链 断裂，并表现出一定的自催化作用。自催化作用可导致微球降解的非均一性，影响程度 受微球结构的影响很大，采用乳化一溶剂萃取法制备的四种聚合物微球的致密结构更易 导致降解非均一性，其降解过程符合自催化水解降解的动力学方程，并由此计算得出降 解速率常数以及降解半衰期。此外，不同的体外释药方法以及药物的包载对微球降解失 重有一定的影响。此研究在国内尚无相应文献