活血化瘀中药在抗凝治疗中的作用

背景 抗凝治疗对于心血管病的防治有着重要的意义。现有抗凝治疗主要以西药为主,包括肝素、华法林、水蛭素等。其中肝素为注射剂,不便长期抗凝；华法林作为主要的口服剂广泛应用于心血管抗凝治疗中,但其药物安全窗窄,需要临床检测的特点直接带来了临床依从性差。而临床中,活血化瘀中药在抗凝治疗方面已经广为应用,大多为口服,具有服用方便、相对安全、副作用较小、病人依从性好的特点,但缺乏系统评价这类中药的抗凝效果。 目的 总结活血化瘀中药在心血管疾病抗凝治疗中的作用,结合实验确认其抗凝作用,以及抗凝血酶活性；评价不同药物配伍的抗凝效果,为临床抗凝治疗提供依据。 方法 实验研究 1.抗凝血酶效价实验 分别取含有0.5%纤维蛋白原的Tris-HCl缓冲液0.2mL,于室温下滴于滴定板上,加入50μL待测液充分混匀,滴加5μL凝血酶(40U／mL)迅速匀散,同时计时,用针尖拨动溶液,当有丝状凝结物被针挑起时,记下时间,其所需凝血酶,用量即为V1,若lmin内未凝结,则以分钟为间隔继续滴加,每次2μL,记下针尖能挑起丝状凝结时的消耗凝血酶的体积。用同法以蒸馏水作对照。按下式计算每克供试品抗凝血酶活性单位AT-U。 式中：U—每1g药材抗凝血酶活性效价,单位U／g； C1—凝血酶溶液的浓度,U／mL；该实验中为40U／mL； C2—供试品溶液的浓度,g／mL；该实验中为lg／mL V1—消耗凝血酶溶液的体积,mL； V2—供试品溶液的加入量,mL；该实验中为0.05mL； W—取样量。该实验中为0.2mL。 中和一个单位的凝血酶的量,为一个抗凝血酶活性单位。 2.药物配伍抗凝血实验 选取抗凝血酶效价实验中抗凝血酶活性最强的三味中药,A、B、C,组成A+B、A+C、B+C、A+B+C四种配伍；阳性对照药为华法林钠片,2.5mg／片。 采用完全随机对照设计,将60只wistar大鼠分为空白组、阳性对照组,A+B、A+C、B+C、A+B+C四个配伍组,共6组中,每组10只。空白组给予蒸馏水；阳性对照华法林组给予成人剂量0.1mg/kg的4倍(0.4 mg/kg)的华法林,溶于蒸馏水；试验药物各组按成人常用量8倍折合成小鼠用量2g／kg／d给药。各组均灌胃给药,每日1次,连续7天,末次给药后1h,自腹主动脉采血测定凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原含量(FIB)。 统计处理：采用SPSS13.0软件,运用多样本均数比较的方差分析(analysis of variance, ANOVA)的方法,比较各处理组之间的差异性；多个样本均数间的多重比较(multiple comparison)的方法,比较各处理组与空白组、各处理组两两之间的差异性。 临床研究 本研究选取2009年1月至2009年12月,在广东省中医院心脏中心就诊,根据WHO1979年关于冠心病诊断标准,确诊为冠心病,并且属于慢性心肌缺血综合症者共60例。完全随机对照将他们分为治疗组,对照组,每组30例。治疗组给予中成药复方血栓通胶囊3粒,tid,连续应用30天；对照组：给予拜阿司匹林100mg,qd,连续应用30天；两组均给予扩冠等常规治疗。各组分别于纳入试验当天(服药前)、服药后第31天分别采外周抗凝血送检PT、TT、APTT、FIB；并记录症状疗效评分表。 结果 实验研究 所有药物组抗凝血酶活性单位AT-U均显著高于空白组；按AT-U从大到小顺序排列,依次为土鳖、丹参、赤芍、僵蚕、水蛭、地龙、川芎、红花。其中,分别与水蛭比较,土鳖、丹参、赤芍、川芎的抗凝血酶活性单位AT-U大于水蛭,红花小于水蛭,而僵蚕、地龙则无显著差异;分别与僵蚕比较,土鳖、丹参、赤芍大于僵蚕,地龙、川芎、红花小于僵蚕,水蛭无显著差异；分别与地龙比较,水蛭、僵蚕、土鳖、丹参、赤芍大,川芎、红花无差异；与土鳖比较,各组均显著小于它；与丹参比较,土鳖大于它,水蛭、僵蚕、地龙、川芎、红花小,赤芍无显著差异；与川芎比较,水蛭、僵蚕、土鳖、丹参、赤芍均大于它,地龙、红花无显著差异；与赤芍比较,土鳖大于它,水蛭、僵蚕、地龙、川芎、红花小于它,丹参无显著差异；与红花比较,水蛭、僵蚕、土鳖、丹参、赤芍均大于它,地龙、川芎无显著差异。抗凝作用最强的前三个药物为土鳖、丹参、赤芍。 土鳖、赤芍、丹参三者不同的配伍用药,对大鼠TT、PT、APTT均有不同的影响,差异有显著性意义(P<0.05)；其中华法林与四种中药配伍方式均有延长大鼠的PT、TT效果(P<0.05)；与华法林阳性对照组比较,四种中药配伍延长PT、TT的作用差异无显著性意义(P>0.05)；四种中药配伍彼此之间两两比较,对PT、TT的影响无显著差异(P<0.05)；与空白组、华法林、以及其它三种配伍比较,土鳖A+丹参B+赤芍C明显延长APTT(P<0.05)。空白组、华法林组、土鳖A+丹参B、土鳖A+赤芍C、丹参B+赤芍C、土鳖A+丹参B+赤芍C对FIB的影响无显著性差异。临床研究 治疗组、对照组两组患者一般情况差异无统计学意义(>0.05),具有可比性。治疗前两组间PT、TT、APTT、FIB比较无显著差异(p>0.05);治疗后和治疗前同组比较,治疗组与对照组的PT、TT均较治疗前有所升高(p<0.05),但都尚在正常值范围内；治疗后两组间PT、TT、APTT、FIB比较无显著差异(p>0.05),均值均在正常范围内。治疗前两组间中医症状评分值无显著差异(p>0.05)；治疗前后比较,治疗组、对照组症状评分均有下降,差异有显著性(p<0.05);治疗后,两组间比较,治疗组症状评分值下降更显著(p<0.05)。 结论 现在及今后抗凝治疗的热点在于发现直接的凝血酶抑制剂,水蛭素已经被证实具有强大的直接抑制凝血酶作用。在本研究中,我们发现活血化瘀中药中,除水蛭外,土鳖、丹参、赤芍、僵蚕、地龙、川芎、红花也含有凝血酶的直接抑制成分,其中以土鳖、丹参、赤芍抗凝血酶活性最强。 体外实验中,活血化瘀药物土鳖、丹参、赤芍、僵蚕、水蛭、地龙、川芎、红花均有确切抗凝作用；在大鼠体内抗凝实验中,不同配伍土鳖A+丹参B、土鳖A+赤芍C、丹参B+赤芍C、土鳖A+丹参B+赤芍C,四种方式具有与华法林同样的抗凝效果,并且抗凝机制涉及环节更多,涵盖了凝血过程的内源性、外源性以及共同途径。所以认为活血化瘀中药单味药、配伍组合均有确切抗凝效果,活血化瘀中药可以作为临床抗凝治疗中有效、安全、方便的制剂。 活血化瘀中成药复方血栓通胶囊在治疗“冠心病”属于慢性心肌缺血综合症者时,与拜阿司匹林一样具有改善临床症状的功效,且比拜阿司匹林效果更为显著。其具有一定抗凝作用,这种抗凝作用是温和的,仅引起PT、TT轻微升高,并未引起凝血指标超出正常值；这种抗凝作用与拜阿司匹林的抗凝作用相比,无显著差异,所以对于属于慢性心肌缺血综合症的冠心病患者,如果不能耐受阿司匹林,其二级预防可以选用复方血栓通胶囊。