研究目的:研究当归补血汤(Danggui Buxue Tang,DBT)对正常小鼠、荷瘤小鼠和骨髓移植小鼠免疫功能的影响,加深该方在免疫学方面的了解,为其临床应用提供新的资料。
实验方法:本实验主要分为三个部分,分别以正常小鼠,荷瘤小鼠和骨髓移植小鼠为模型。
第一部分:以正常C57BL/6纯系小鼠为研究对象。实验动物随机分为2组,即正常对照组,DBT组,两组动物分别给予0.5ml生理盐水,0.5mlDBT(即12g生药/kg.d)灌胃,连续处理15天。用3H-TdRT掺入法测定小鼠脾细胞对有丝分裂原的增殖反应,溶血空斑试验测定抗体形成细胞数目,迟发型超敏反应测定CD4+Th1细胞功能,MTT法测定NK细胞活性,中性红吞噬实验测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性,并用RT-PCR测定小鼠脾细胞IL-2、INF-γmRNA的表达,3H-TdRT掺入法测定IL-2活性,Griese法测定小鼠腹腔巨噬细胞NO的含量以从细胞、分子等不同层次上观察当归补血汤对正常小鼠免疫功能的影响。
第二部分:以荷EL-4瘤株C57BL/6纯系小鼠作为病理模型,皮下肿瘤接种(1x106个瘤细胞)7天时随机分为4组,肿瘤模型组,DBT组(24g/kg.d),Cy组(7.5mg/kg.d),DBT+Cy组,另设正常对照组,连续接受相应处理15天。每日游标卡尺测定肿瘤长短径,并观察荷瘤小鼠生存时间,以检测DBT的抑瘤作用;传统免疫学方法(T、B淋巴细胞增殖反应,DTH,PFC,CTL的杀伤活性,TNF-α活性及外周血、骨髓有核细胞计数等)检测DBT的抑瘤作用与机体免疫功能的关系及其对环磷酰胺化疗的增效减毒作用。
第三部分:一次性接受全身137Csγ线致死量照射8.5Gy,照射后12小时内经尾静脉输注同基因骨髓细胞1×107/只的BALb/c小鼠为病理模型。实验分组如下:1:正常对照组,不做任何处理的正常BALb/c小鼠;2:仅接受γ线一次性致死量照射,未进行骨髓移植组;3:骨髓移植组,仅进行同基因骨髓细胞移植;4:DBT+骨髓移植组,进行同基因骨髓细胞移植同时给予DBT治疗(12g生药/kg.d),每日同一时间灌胃一次。分别于骨髓移植后30天、60天,应用流式细胞技术结合传统的免疫学方法检测受体小鼠免疫功能的恢复情况。检测指标主要包括:外周血RBC、WBC计数,骨髓有核细胞计数,胸腺、脾细胞总数和相应淋巴细胞亚类,以及反应免疫细胞功能的DTH、PFC等。
实验结果:第一部分实验结果发现:1)给予DBT12g/kg.d,灌胃,连续处理15天,与正常对照组比较,各项表示免疫细胞功能的指标均明显增高(p<0.01-0.05)。2)DBT组(剂量12g/kg.d)与正常对照组比较小鼠脾细胞IL-2、INF-γmRNA的表达,IL-2活性,及小鼠腹腔巨噬细胞NO的含量均有显著性差异(p<0.05)。
第二部分实验结果发现:接受相应处理15天后,1)与肿瘤模型组比较,DBT组,Cy组,DBT+Cy组均可显著减缓小鼠肿瘤生长速度(p<0.01-0.05),明显延长荷瘤小鼠生存时间(p<0.05)。2)与肿瘤模型组比较,DBT组各项免疫学指标增强,差异显著
