疏肝法对输卵管不孕患者IVF-ET周期妊娠结局及OSFs 影响的研究

第一部分：逍遥散对IVF-ET患者卵母细胞和胚胎质量、子宫内膜容受性及妊娠结局的影响 目的：观察疏肝法对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者治疗周期卵母细胞和胚胎质量、子宫内膜容受性及妊娠结局的影响。 方法：2010年2月至2011年10月于白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心行IVF-ET符合纳入标准和排除标准的58例输卵管性不孕症患者，按照随机数字表法随机分为实验组（逍遥散配合控制性超排卵组）、对照组（单纯性控制性超排卵组）。观察促性腺激素(Gn)使用天数及使用量；HCG注射日血清中E2、P、LH水平；子宫内膜厚度及形态；获卵个数、成熟卵数（MII期）、受精率、卵裂率、胚胎数、优质胚胎数、生化妊娠率、临床妊娠率、有无并发症及其种类。 结果：(1)两组患者年龄、体重指数、窦状卵泡数以及基础促卵泡生成激素水平差异无统计学意义(P>0.05)，两组资料具有可比性。(2)两组患者注射HCG日血清E2、P、LH值比较：实验组血清E2、LH水平显著高于对照组，有统计学意义(P<0.05)；血清P水平无显著性差异(P>0.05)。(3) Gn使用天数、Gn总量及子宫内膜类型及厚度的比较：两组之间Gn使用天数无显著性差异(P>0.05)，Gn总量实验组低于对照组，有统计学意义(P<0.05)。两组中子宫内膜类型差异不明显(P>0.05)，子宫内膜厚度实验组较对照组高，有统计学意义(P<0.05)。(4)两组患者取卵数、成熟卵数、2PN受精率、卵裂率以及优质胚胎率等指标的比较：实验组：取卵412枚，包括成熟卵358枚，成熟卵率86.89%；正常受精(2PN)受精卵共303枚，2PN受精率73.54%；胚胎卵裂共282枚，卵裂率93.07%；得到优质胚胎共199枚，优质胚胎率为74.11%。对照组：获卵353枚，包括成熟卵273枚，获取成熟卵率77.34%；正常受精(2PN)受精卵218枚，(2PN)受精率61.76%；形成卵裂胚胎共193枚，卵裂率88.53%；得到优质胚胎（1、2级胚胎）共119枚，优质胚胎率61.66%。实验组与对照组在获卵数、卵裂率等指标中差异不明显，无统计学意义(P>0.05)。实验组在成熟卵数、受精率以及优质胚胎率指标中较对照组高，差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)两组患者妊娠数及妊娠率等指标的比较：实验组发生妊娠21例，妊娠率70%；对照组发生妊娠14例，妊娠率42.86%，两组患者妊娠率差异显著，具有统计学意义(P<0.05)。(6)两组患者并发症比较：实验组自然流产1例；对照组OHSS1例，胎停育1例。无其它并发症发生。两组之间并发症发生率无统计学意义(P>0.05)。 第二部分：逍遥散对行IVF-ET周期患者卵泡液及颗粒细胞卵母细胞分泌因子GDF-9和BMP-15的影响 目的：本实验从卵母细胞分泌因子(GDF-9、BMP-15)方面，探讨逍遥散提高卵母细胞质量，改善妊娠结局的部分作用机制。 方法：选择于2010年2月至2011年10月在白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心行体外受精-胚胎移植的符合纳入标准和排除标准的58例输卵管性不孕症患者，按照随机数字表法随机分为实验组（逍遥散方配合控制性超排卵组）30例、对照组（控制性超排卵组）28例。于取卵日留取患者卵泡液，用人淋巴细胞分离液分离出颗粒细胞。采用western-blot方法检测卵泡液中卵母细胞分泌因子GDF-9和BMP-15的蛋白含量，运用RT-PCR方法检测颗粒细胞中GDF-9mRNA和BMP-15mRNA的表达。 结果：(1)两组卵泡液GDF-9蛋白表达比较：实验组和对照组之间内参照β-actin无差异，实验组中卵泡液GDF-9蛋白水平为0.783±0.098，明显高于对照组蛋白水平的表达0.588±0.039，其差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)两组颗粒细胞中GDF-9mRNA表达结果比较：实验组与对照组内参照GAPDH表达量一致，实验组GDF-9mRNA的表达为1.310±0.903，显著高于对照组的表达0.935±0.190，表达差异有统计学意义(P<0.05)。(3)两组卵泡液BMP-15蛋白结果比较：实验组和对照组内参照β-actin表达无差异，实验组中卵泡液BMP-15水平为0.876±0.0846，高于对照组的蛋白表达水平0.418±0.0875，两组间差异有意义(P<0.01)。(4)两组中颗粒细胞BMP-15mRNA表达结果比较：实验组与对照组内参照GAPDH表达量未见差异，实验组BMP-15mRNA表达为0.990±0.095，明显高于对照组表达0.670±0.334，差异具有统计学意义(P<0.01)。 结论：(1)逍遥散方与控制性超促排卵共同作用于IVF-ET患者，能够降低Gn用量，减轻患者经济负担。(2)逍遥散方可以提高IVF-ET周期患者的成熟卵子数、受精率、优质胚胎率、子宫内膜厚度及临床妊娠率，从而改善妊娠结局。(3)逍遥散方提高IVF-ET妊娠结局可能与增加卵泡液及颗粒细胞中卵母细胞分泌因子GDF-9、BMP-15蛋白含量及上调其基因表达从而改善卵母细胞质量有关。