研究背景：
病毒性胃肠炎是世界各国高发疾病之一,尤其在发展中国家因胃肠炎疾病死亡的儿童人数高于相应的发达国家。随着检测技术的不断发展和腹泻研究的深入,病毒性腹泻在急性非细菌性腹泻中显得越来越重要,占60%。引起婴幼儿腹泻的常见病原体以轮状病毒(Rotavirus, RV)为主,之后相继发现诺如病毒(Norovirus, NoV)、扎幌病毒(Sapovirus, SaV)、肠道腺病毒(denoviruses, AdV)和星状病毒(Astroviru,AstV)也是引起急性腹泻的主要病因。
据统计,在世界范围内由A组轮状病毒起因的腹泻每年大约有1.11亿,其感染对象主要为5岁以下儿童,在我国每年约有1-2万名5岁内儿童死于轮状病毒腹泻。杯状病毒在世界范围内流行仅次于轮状病毒,这与水源性和食源性胃肠炎的暴发和散发有着密切的关系,其自身毒性较弱,且发病过程具有自限性,但传染性较强,如不能及时治疗可导致患者死亡。肠道腺病毒引起的腹泻呈全球分布,多以区域性流行为主,少见暴发流行报道。由肠道腺病毒引起的腹泻全年均可发生,部分地区有季节性升高现象,以秋冬季常见,Ad41型为流行优势株,部分地区以Ad40为主,也可见非肠道腺病毒引起的腹泻报道。星状病毒感染在世界范围内广泛存在,易感人群以2岁儿童为主,在患儿腹泻粪便中检出率为0.6%～26%,其既可引起医源性感染和散发流行,也有暴发报道,有研究报道它也是成人腹泻散发流行的病原体之一。
国内外近几年对病毒性腹泻的流行病学研究已广泛开展,但多数研究主要针对常住人群5岁内儿童进行研究,针对成人和城乡结合部人群腹泻的报道较少。伴随改革开放急促的步伐,经济、医疗卫生行业也在迅猛发展,但农村、城乡结合部等经济条件却相对落后,由于人员构成复杂流动性大、知识水平低、经济条件差等问题,整体上影响了城市流动人口的卫生保健服务状况,腹泻病的发病率不容乐观,所以本研究前瞻性地收集两家哨点医院(其一为城区人群,其二为城乡结合部人群)2011年6月至2012年5月的儿童腹泻患者和18岁以上成人腹泻标本进行相关病毒研究,以便系统的掌握广州市5岁以下儿童和18岁以上成人病毒性腹泻的流行特征和流行优势株的变化,为以后制定病毒性腹泻的预防控制策略提供科学依据,也为将来研制开发病毒疫苗提供全面系统的背景资料。
研究目的：
1.了解广州市哨点医院2011年6月～2012年5月5岁内儿童和18岁以上成人散发病毒性腹泻中RV、NoV、AdV、AstV和SaV感染状况及流行病学特征,完善我国病毒性腹泻的流行病学基础资料；
2.了解该地区5岁内儿童和18岁以上成人病毒性腹泻中NoV、AdV、AstV和SaV基因型别,探讨4种病毒的流行优势毒株,明确各病毒分子特征及基因型分布情况；
3.为广州地区儿童和成人病毒感染性腹泻的研究提供丰富的背景资料。
研究方法：
1.标本收集：
收集2011年6月～2012年5月期间在广州市白云区某社区卫生服务中心和南方医院第三附属医院检验科就诊的年龄在5岁以下的360例患儿标本和年龄在18岁以上的127例成人腹泻患者粪便标本、人口学资料及流行病学资料。
2.标本处理方法：
每份粪便标本取5～10g或5～10ml,加入PBS,震荡后制成10%的悬液,分装三管后-80℃保存备用。
3.标本病毒检测方法：
使用A群轮状病毒胶体金法检测粪便中的轮状病毒后对符合要求的标本进行核酸提取,用引物JV12Y/JV13I、Ad1/Ad2、Mon269/Mon270和SLV5317/SLV5749分别检测NoV、AdV、AstV和SaV,对纯化后的PCR阳性产物进行测序,测序结果应用BLAST在GenBank上寻找各阳性株的同源序列,应用Clustal W进行多序列对比分析和MEGA5.0构建遗传进化树,分析NoV、 SaV、AdV和AstV的基因型别,判断NoV、AdV、AstV和SaV的流行优势毒株。
4.统计分析方法：数据管理采用Epidata2.1进行双份录入,运用统计软件SPSS13.0对收集的患者资料进行统计分析,分析广州地区病毒性腹泻的流行病学特征,检验水准α为0.05。
结果：
1.2011年6月-2012年5月共收集广州市两家哨点医院5岁内患儿粪便标本和问卷共360份。患儿主要监护人文化程度以大专及以上最多53.0%(188/355),职业以在家及待业为主20.2%(71/351)。
2.共收集18岁以上符合要求的成人腹泻患者粪便127份,成人患者中平均年龄为(41.91±17.92)。患者文化程度以大专及以上占最多,为50.4%(64/127),文盲最少为0.8%(1/127),职业以办公室白领占最多,为25.2%(32/127)。
3.五岁内儿童RV、NoV、AdV、SaV、AstV的检出率分别为30%(108/360)、8.9%(32/360)、7.5%(27/360)、1.7%(6/360)、2.5%(9/360),以轮状病毒检出最高。混合感染占5%(18/360),以轮状病毒混合感染为主。五种病毒检出者主要集中在3岁内儿童,轮状病毒集中发病季节主要集中在9-11月,以10月高发,札幌病毒以11月到12月为发病高峰,星状病毒仅在10-12月有检出,这三种病毒散发主要集中在秋冬季,而诺如病毒发病高峰以6月最为集中,腺病毒的发病高峰在2011年以9月最高,2012年2月最高。
4.成人患者五种病毒的检出率以诺如病毒检测率最高,为8.7%(11/127),其次是轮状病毒5.5%(7/127),腺病毒2.4%(3/127),札如病毒2.4%(3/127),星状病毒0.8%(1/127)。未见混合感染。病毒感染主要集中在60岁以上这个年龄组中占25%(7/28)。发病季节显示：轮状病毒的流行期为12月-次年2月份,诺如病毒的发病高峰在9月和12月,腺病毒、札幌病毒和星状病毒检出例数较少,还不能显示季节分布特点。
5.序列分析结果：360份儿童粪便标本中检出诺如病毒感染32株,测序分析,26株属于GⅡ-4型,其中3株属于GⅡ-4-2006a。3株属于GⅡ-13型,1株为GⅡ-5,2株GⅡ-6。检出6株SaV,6株为都为GI型,其中4株为GI-1型,2株属于GI-2；检出AdV27例,其中Ad-41型18例,9例非肠道腺病毒中检出2份Ad1型,2份Ad2型,1份Ad7型,2份Ad12型,2份Ad31型；而检出9株AstV均为HAstV-1。
6.127份成人腹泻标本中检出诺如病毒11株,其中8株属于GⅡ-4,1株GⅡ-b,1株GⅡ-6,1株GI-1。腺病毒检出3例均为Ad41,星状病毒1例阳性为HAst-1;札幌病毒阳性2例属于GⅠ-2,1例属于GⅣ。
结论：
1、病毒性腹泻是引起婴幼儿和成人腹泻的重要病原,其中儿童以轮状病毒为主,成人以诺如病毒为主,3岁以内儿童和60岁以上老年人为感染高发人群,不同病毒引起的季节性高峰有所不同,故应开展长期、连续的的疾病监测和病原学检测；
2、NoV GII-4型是引起广州市哨点医院5岁内儿童和18岁以上成人散发腹泻的流行优势株,其中3株属于GⅡ-4-2006a,而在我国很多地区均已检测到2006b,对2006a检出报道较少；AdV引起腹泻的流行优势株为Ad41,同时也检出了其他多个非肠道腺病毒的基因型别,但未检出Ad40型,表明Ad41是广州地区流行优势株,与国内外AdV血清型变化趋势相符；AstV在儿童和成人腹泻中的流行优势株均为AstV-1,与我国国内情况相同；儿童SaV以GI-1为主,而成人以GI-2型为主。四种病毒的感染基因型别多样,应引起重视。
