太平洋牡蛎（Crassostrea gigas Thunberg）中氨基酸和寡肽的提取及活性初步研究

本文以太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)为原料,较系统研究了其所含的各种营养成分如各种微量元素、氨基酸、糖元、蛋白质等的含量,并对牡蛎寡肽的制备和其抗癌活性进行了初步研究,为进一步深入的研究牡蛎中各种活性成分,提供了基础数据。 首先,太平洋牡蛎中含有丰富的牛磺酸,本文采取了水提、离子交换、结晶和重结晶对牛磺酸提取分离工艺;利用薄层色谱、红外光谱、核磁共振色谱等方法鉴定了结构,为下一步大量生产奠定了基础。其次,本文应用原子荧光光谱、原子吸收分光光度计和火焰原子吸收等方法分别对太平洋牡蛎中的微量元素硒、铬、镉、钴、镍、钼、锌、铜、锶和锰等的含量进行了分析。其中硒、锌的含量较高。其次,制备了丙酮脱脂蛋白,采用胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶五种商业酶对蛋白质进行酶解,经比较选择了胰蛋白酶作为工具酶,并对酶解条件和时间分别采用正交实验和Tricine-SDS-PAGE电泳法进行优化。胰蛋白酶酶解液经凝胶过滤Sephadex G25 Fine分离得到10个洗脱峰,收集各峰,并对Fr6、Fr7、Fr9、Fr10四个分子量较小聚合度不同的肽组分进一步分析。下一步应用Superdex Peptide HR10/30制备柱、HQ-20阴离子交换柱分离纯化四个组分。并确定了Fr6、Fr7、Fr9分子量。应用各种光谱方法(如:紫外光谱、红外光谱、NMR等)对其中的Fr10进行了结构分析,证明其为色氨酸。最后,对寡肽及Fr6、Fr7、Fr9进行了抗肿瘤活性筛选,结果显示太平洋牡蛎的脱脂蛋白质经酶解得到的寡肽有较好的抗肿瘤作用,样品浓度为100μg/mL浓度时对A549(肺癌细胞)、P388(白血病细胞)和K562(人白血病细胞)均具有细胞增殖抑制活性,抑制率分别为19.60%、54.88%和11.23%。这说明酶解制备的寡肽粗品具有抗肿瘤活性,具有进一步的开发价值。