蜜环菌菌索多糖降血糖作用机理的研究

本试验对蜜环菌菌索多糖进行了提取、分离和纯化,得到了两种多糖成分,分别为水相多糖(AMP-1)和盐相多糖(AMP-2)。以AMP-1为材料,对其降血糖作用机理进行深入的研究。研究的结果和结论如下： 蜜环菌菌索多糖的提取、分离与纯化： 静置培养蜜环菌一段时间,取其菌索打粹,进行水提、醇沉、浓缩合并上清,透析后经DEAE-纤维素柱色谱(cl-1型)分离,得到了两种多糖成分AMP-1和AMP-2。测得AMP-1为均一组分,AMP-2至少包含有两种组分。 蜜环菌菌索多糖体内降血糖与清除自由基作用： 复制四氧嘧啶糖尿病小鼠模型。研究AMP-1对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖值、胰岛素值和胰腺、肝脏、脾脏、肾脏组织中的SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量及其干重、体重的影响。结果表明,AMP-1能显著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖值,增加血清胰岛素水平；能显著提高小鼠体内SOD、GSH-Px活性并降低MDA含量,且呈剂量依赖关系；能抑制AXN造成的小鼠体重的减轻与肝脏、肾脏、胰腺的萎缩和脾脏的增大。 蜜环菌菌索多糖对AXN损伤的胰岛细胞的影响： 培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1),以AXN损伤,培养液中加入不同浓度的AMP-1 (50、100、200、300、400、500 mg·L-1), MTT法测细胞存活率；PI荧光染色法观测凋亡细胞密度；流式细胞术法检测细胞凋亡率；结果如下：AMP-1可减少AXN对INS-1细胞的损伤,增加INS-1细胞的存活率；AMP-1浓度在50mg·L-1至500 mg·L-1之间均可提高受AXN损伤的INS-1细胞的存活率,其中浓度为400 mg·L-1时存活率最高；凋亡细胞密度,随AMP-1浓度的增大而降低；AMP-1组INS-1细胞凋亡率均低于AXN组。 蜜环菌菌索多糖体外抗凋亡通路的研究： 蜜环菌菌索多糖对AXN损伤的胰岛细胞的抗凋亡作用：培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1),以AXN损伤细胞,培养液中加入不同浓度的AMP-1(50、100、200、300、400、500 mg·L-1),通过流式细胞仪检测细胞凋亡率以及用western blot法检测蛋白bcl-2和bax的表达来研究AMP-1对AXN损伤的INS-1细胞凋亡的影响。结果如下：在AMP-1处理组中,当其浓度在50-500 mg·L-1范围时,AMP-1对AXN引起的INS-1细胞的凋亡现象有着显著的抑制作用。 通过体内外实验表明,AMP-1有提高抗氧化酶活力,增强机体清除自由基能力,具有保护和修复胰岛β细胞的作用。同时,可以提高bcl-2和降低bax的蛋白表达量,显示AMP-1抑制细胞凋亡的第二条通路,拮抗细胞凋亡。以上是AMP-1降血糖作用的主要作用机理,另外AMP-1还有增强机体免疫功能等作用。本研究为蜜环菌菌索多糖类保健食品和降血糖药品的研发提供了一定的理论依据,对推动食用菌产业的发展,具有重要意义。