黑灵芝多糖的免疫调节活性及其作用机制

黑灵芝是一种广受关注的药食两用真菌，在中国作为传统药材和健康食品使用已经有几千年的历史。多糖被认为是黑灵芝中最主要的活性成分。本论文以从江西赣州地区黑灵芝中分离纯化的黑灵芝多糖PSG-1为研究对象，运用细胞和分子生物学技术，从体内和体外水平研究PSG-1的免疫调节活性，并以巨噬细胞和脾淋巴细胞为靶细胞，深入探讨PSG-1免疫调节活性的作用机制。主要结论归纳如下： 一、PSG-1对巨噬细胞具有免疫调节活性。PSG-1能够增强小鼠巨噬细胞的吞噬能力，诱导NO、细胞因子（TNF-α和IL-1β）和ROS的生成。 二、TLR4是PSG-1激活巨噬细胞的主要受体；来源于NADPH氧化酶的ROS作为PI3K/Akt/MAPK/NF-κB的上游信号通路调节PSG-1诱导的TNF-α产生，证明PSG-1通过ROS/PI3K/Akt/MAPK/NF-κB信号通路激活巨噬细胞。 三、PSG-1对脾淋巴细胞具有免疫调节活性。PSG-1既能与ConA或LPS协同促进小鼠脾T、B淋巴细胞增殖，也能直接促进小鼠脾T、B淋巴细胞增殖；PSG-1可显著提高小鼠脾淋巴细胞CD3+、CD4+、CD19+细胞百分比及CD4+/CD8+的比值；此外，PSG-1还可促进T淋巴细胞分泌Thl型细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4，提高B淋巴细胞Ig分泌水平。 四、PSG-1通过激活脾淋巴细胞NO/cGMP、cAMP/PKA、Ca2+/PKC/Calcineurin/NFAT信号转导通路发挥免疫调节活性；TLR4可能是PSG-1作用于脾淋巴细胞的受体。 五、PSG-1通过增强腹腔巨噬细胞吞噬能力，提高TNF-α、IL-1β和NO等活性分子的分泌抵抗Cy造成的免疫抑制，可能与增强TLR4表达，激活MAPK、PI3K/Akt和NF-κB通路有关；PSG-1通过增强Cy所致免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖，提高NK细胞和CTL细胞活性，升高CD4+和CD8+细胞的比例和CD4+/CD8+的比值，从而恢复Cy诱导的免疫抑制，可能与增强TLR4表达，激活NO/cGMP、cAMP/PKA、Ca2+/PKC/Calcineurin通路有关。 六、PSG-1恢复Cy所致免疫抑制小鼠的白细胞、红细胞和血小板数量降低，提高造血功能；PSG-1恢复Cy所致免疫抑制小鼠血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10，IgA、IgG、IgM和溶血素的水平；此外，PSG-1增强Cy所致免疫抑制小鼠的总抗氧化能力，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力，降低丙二醛含量。 七、PSG-1增强荷瘤C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，提高ROS的生成，激活MAPK、PI3K/Akt和NF-κB通路，此外PSG-1还能够提高荷瘤C3H/HeN小鼠脾淋巴细胞增殖水平，增强NK细胞活性，升高细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ、IL-12分泌，调控细胞亚群，表明PSG-1发挥抗肿瘤活性与增强腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞免疫功能相关。但PSG-1对荷瘤C3H/HeJ小鼠几乎无抗瘤作用，也不能激活腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞免疫功能，表明TLR4是PSG-1发挥免疫调节和抗肿瘤活性的关键受体。