目的：以产后抑郁模型动物为研究载体,采用具有补益心脾作用的参芪解郁方进行干预,从行为学、脑组织形态学、神经内分泌系统相关激素与受体、单胺递质及其代谢产物的变化等方面,探讨产后抑郁症(PPD)神经生物学发病机制以及中医补益心脾法的干预作用,明确参芪解郁方治疗PPD的作用途径,进一步完善补益心脾法在PPD治疗方面的理论学说。
方法：选用雌性SD大鼠,随机分为正常、假手术、模型、中药、西药组,每组均设处理后1、2、4、6w四个不同观察时点。模型、中药、西药组经去势手术后连续雌孕激素注射制备PPD模型,后分别予双蒸水、参芪解郁方、氟西汀灌胃干预。正常组给予等容积双蒸水,假手术组行假手术后予双蒸水灌胃。所有动物分别于1、2、4、6w不同时点予行为学测试。测试完毕后,行相关指标检测：①通过HE染色观察大鼠脑前额皮质、海马、下丘脑神经细胞损伤情况；②采用酶联免疫法和放射免疫法检测血清HPA、HPG轴激素水平；③采用免疫组化法测定脑前额皮质、海马、下丘脑ERα、β表达；④采用高效液相法测定脑前额皮质、海马单胺递质及其代谢产物含量。
结果：
1.一般情况观察
1.1外观与活动状态：模型大鼠精神、活动状态较正常、假手术组差,表现为皮毛晦暗,毛发梳理、寻觅探查等动作明显减少,自由活动度降低,于造模后1、2w时显著,4、6w时虽有好转,但仍较正常大鼠状态差。经药物干预后,中、西药组上述抑郁征象较模型组改善,6w时可基本恢复正常状态。
1.2体重：模型组各时点均较正常、假手术组降低(P<0.01,P<0.05)。中药组2、4、6w及西药组各时点均较模型组升高(P<0.01,P<0.05)。模型、中药、西药组体重均呈增加趋势,但模型组较中、西药组增长幅度明显缓慢。
2.行为学观察
2.1蔗糖水消耗：模型组各时点较正常、假手术组降低(P<0.01,P<0.05)。西药组2w及中、西药组4、6w较模型组升高(P<0.01)。模型组显示为逐渐下降规律,中、西药组则表现逐渐上升趋势。
2.2 OFT：模型组各时点水平与垂直得分均较正常、假手术组降低(P<0.01,P<0.05)；中、西药组除1w外余各时点水平得分与中药组1w及中、西药组2、4w垂直得分均较模型组升高(P<0.01,P<0.05)。模型、中药、西药组水平得分及西药组垂直得分均呈升高趋势,模型、中药组垂直得分显示降低后又逐渐升高规律。
2.3 FST：模型组各时点不动时间较正常、假手术组延长(P<0.01,P<0.05),各时点挣扎时间与2、4、6w游泳时间均较以上两组缩短(P<0.01)。中、西药组各时点不动时间较模型组缩短(P<0.01,P<0.05),二者各时点挣扎时间及2、4、6w游泳时间较模型组延长(P<0.01,P<0.05)。模型组不动时间呈增加后又减少趋势,挣扎时间呈稍减少后逐渐增加,此后又迅速减少趋势,游泳时间呈降低后又逐渐升高趋势；中、西药组不动时间呈逐渐减少趋势,挣扎时间表现为逐渐增加后又降低,游泳时间则表现逐渐升高趋势。
3.脑组织病理结构观察
正常、假手术组前额皮质、海马细胞数量多,排列整齐,胞浆饱满,核仁清晰；下丘脑细胞排列规律,形态正常。模型组上述三个部位病理损伤1、2w尤为显著,4、6w无明显恢复。前额皮质、海马细胞数量明显减少或呈萎缩状,间隙增大,排列疏松紊乱,细胞淡染,着色不匀,海马部分细胞亦出现空泡化及核固缩；下丘脑细胞肿胀明显,着色不均,部分细胞出现核固缩。中、西药组病理损伤1w较模型组有所减轻,2w改善明显,4、6w状况恢复基本接近正常水平。
4.神经内分泌系统相关激素测定
4.1 HPA轴激素：模型组各时点CRH、ACTH、Cor均较正常、假手术组升高(P<0.01,P<0.05)。西药组4、6w的CRH,除中、西药组1w及西药组4w外二者余各时点ACTH,中、西药组2、4、6w的Cor均较模型组降低(P<0.01,P<0.05)。中、西药组ACTH呈逐渐减少趋势；模型、中药、西药组Cor呈升高后又逐渐降低趋势,而模型组升高显著减低缓慢。
4.2 HPG轴激素：模型组各时点GnRH、FSH,1w的LH,2、4、6w的E2均较正常、假手术组降低(P<0.01,P<0.05)；2、4、6w的LH,1w的E2,各时点P均较以上两组升高(P<0.01,P<0.05)。西药组各时点GnRH、E2及2、4、6w的FSH、1w的LH,中药组2、4、6w的GnRH、FSH及各时点E2均较模型组升高(P<0.01,P<0.05)；中、西药组2、4、6w的LH及各时点P均较模型组降低(P<0.01,P<0.05)。模型、中药、西药组GnRH、FSH、LH均呈逐渐升高趋势,E2、P呈明显下降趋势,上述指标经中、西药物干预后可基本恢复正常水平。
5.ER表达变化
5.1 ERα：模型组2、4、6w前额皮质、海马、下丘脑表达较正常、假手术组减少(P<0.01,P<0.05),1w海马、下丘脑表达较以上两组增加(P<0.01,P<0.05)。中药组4、6w前额皮质,西药组2、4、6w前额皮质、下丘脑,中、西药组2、4、6w海马,中药组各时点下丘脑表达均较模型组增加(P<0.01,P<0.05)。模型、中药、西药组三个部位表达均呈下降趋势,且以模型组下降更为明显。
5.2 ERβ：模型组1w前额皮质,1、2w海马、下丘脑表达均较正常、假手术组增加(P<0.01,P<0.05),4、6w前额皮质、下丘脑及6w海马表达均较以上两组明显减少(P<0.01)。中、西药组6w前额皮质及4、6w海马,中药组4、6w及西药组2、4、6w下丘脑表达均较模型组增加(P<0.01,P<0.05)。各组三个部位表达变化与ERα相似。
6.单胺递质及其代谢产物检测
6.1单胺递质：模型组各时点前额皮质、海马5-HT、NE、DA均较正常、假手术组减少(P<0.01,P<0.05)。中药组2、4、6w及西药组各时点前额皮质,中、西药组各时点海马5-HT、NE均较模型组增加(P<0.01,P<0.05),中药组4、6w及西药组2、4、6w前额皮质,中药组1、6w及西药组1w海马DA均较模型组增加(P<0.01,P<0.05)。模型组前额皮质、海马5-HT,前额皮质NE、DA均呈逐渐下降趋势,海马NE呈明显下降后又轻度升高趋势,海马DA则表现为升高后逐渐下降规律。中药组前额皮质及中、西药组海马5-HT,西药组前额皮质及中药组海马NE均呈逐渐升高趋势；中药组前额皮质NE表现为稍下降后又逐渐上升规律；中、西药组海马DA则表现为下降趋势。
6.2单胺递质代谢产物：模型组1w前额皮质、海马5-HIAA较正常、假手术组增加(P<0.01,P<0.05),余各时点两部位5-HIAA及各时点两部位DOPAC含量均较以上两组减少(P<0.01,P<0.05)。中、西药组1w前额皮质、海马5-HIAA较模型组减少(P<0.01,P<0.05)；二者4、6w前额皮质5-HIAA,2、4、6w海马5-HIAA及前额皮质DOPAC均较模型组增加(P<0.01,P<0.05)。模型组前额皮质、海马5-HIAA均呈下降趋势,前额叶皮质DOPAC呈逐渐下降后又升高趋势。中、西药组前额皮质、海马5-HIAA则呈明显减少后又逐渐增加趋势；中药组海马DOPAC表现为升高后又逐渐下降规律。
结论：
1.采用去势后连续激素注射并突然停撤方法建立PPD动物模型,模型大鼠行为学方面可出现活动能力减弱、探索能力降低、面对绝望环境挣扎逃脱反应下降等改变,脑组织形态学方面亦有相应结构损伤发生。该模型在病因学上较好地模拟了PPD发病状态,且重复性好,可为深入探索PPD发病机制及新药研发等提供良好的研究平台。
2.具有补益心脾作用的参芪解郁方对PPD模型大鼠抑郁行为有明显调节作用,同时可促进脑组织病理损伤的恢复。与对照药物SSRIs氟西汀相比,二者在大鼠抑郁行为及脑组织病理损伤方面疗效相当,此为中医补益心脾法治疗PPD提供了理论依据,同时也为中药参芪解郁方的药效学研究奠定基础。
3.建立的PPD模型大鼠血清HPA、HPG轴激素平衡紊乱,与E特异性结合ERα、β功能低下,脑内单胺递质及其代谢产物含量降低,上述系统的改变可能是PPD疾病发生发展的重要神经生物学物质基础。
4.中药参芪解郁方对模型大鼠神经内分泌系统相关激素水平、脑内ER表达及单胺递质与代谢产物含量具有明显改善作用,对上述各独立系统的平衡调节以及对各系统间的整体稳态调控可能是其效应发挥的主要途径。
