痛泻要方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠血清5-HT及VIP含量的影响

目的：腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是临床上常见的胃肠功能紊乱性疾病,中医在其辨证论治上独具优势。肝郁脾虚证是常见中医证型,采用痛泻要方治疗本病在临床上应用广泛。目前实验研究缺乏公认的中医证型动物模型,成功建立中医肝郁脾虚证型IBS-D模型是治疗该疾病的首要前提；大量的临床研究已经证实痛泻要方治疗IBS-D有效,但缺乏深入的中医理论实验研究。本研究为中医证候模型的制备及痛泻要方治疗IBS-D提供实验支持,并进一步完善肠易激综合征的理论研究,为临床治疗选药提供理论和实验支持。方法：选用健康SPF级SD大鼠120只,雌雄各半,8周龄,体重190±l0g。适应性饲养一周后,随机抽取12只(雌雄各半)作为正常组(N)；余下大鼠开始造模。结合吕红等、谭洁等描述的造模方法,采用慢性多因素不可预见性应激联合高脂高糖高热饮食、高温高湿环境建立起接近临床患者病症的中医肝郁脾虚IBS-D大鼠模型。选用大鼠一般状态及体重变化情况、粪便性状评分、痛阈值和肠道敏感性、敞箱行为评分以及糖水偏嗜度作为鉴定模型成功的标准。按照以上四项综合积分排序,选用符合标准的大鼠随机分为模型组(M)、痛泻要方7天治疗组(T7)、双歧杆菌7天治疗组(B7)、痛泻要方14天治疗组(T14)、双歧杆菌14天治疗组(B14),每组12只(雌雄各半)。药物干预：N组、M组,每日均给予同等容量生理盐水灌胃,连续14天；T,组给予痛泻要方水煎液(7.5g/kg. d-1)灌胃,连续7天；B7组每日给予双歧杆菌混悬液(2×107CFU/ml.d-1)灌胃,连续7天；T14组给予痛泻要方水煎液(7.5g/kg. d-1)灌胃,连续14天；B14组每日给予双歧杆菌混悬液(2×107CFU/ml. d-1)灌胃,连续14天。样本取材及处理：治疗结束后,水合氯醛麻醉大鼠,心脏取血,3000r/10min离心取上清液,采用酶联免疫法测试血清5-HT和VIP的含量变化。实验过程中所得数据均采用SPSS17.0进行统计学分析,计量资料满足正态性分布,所得数据采用均数±标准差(x±s)表示：多组间比较运用单因素方差分析,方差齐性组间比较用LSD法,方差不齐时组间比较用DunnettT3法。结果：1、大鼠一般状态：大鼠造模前,其毛色光滑,反应迅速敏捷,精神佳,大便正常。造模结束后,与正常组比较,模型组大鼠毛色欠光泽,甚至有竖毛、活动量减少、食欲减退、喜蜷缩、扎堆、反应迟缓,大便变软或不成形,肛门部或有粪便污物附着等。治疗结束后,与模型组比较,痛泻药方组及双歧杆菌组大鼠一般状态均有较大的改善,食欲增强、活动力增加、反应相对灵敏,稀便减少或有成型。2、体重变化情况：(1)造模结束后,与正常组比较,模型组大鼠体重增长缓慢,体重增长有统计学差异(p=0.00,p<0.05)。(2)7天治疗结束后,与正常组比较,模型组有显著统计学差异(p=0.00,p<0.01),痛泻要方组及双歧杆菌组有统计学差异(p=0.04,0.02,p<0.05)；与模型组比较,痛泻要方组及双歧杆菌组无统计学差异(p>0.05)；与痛泻要方组比较,双歧杆菌组无统计学差异(P>0.05)。(3)14天治疗结束后,与正常组比较,模型组有显著统计学差异(p=0.00,p<0.01),痛泻要方组及双歧杆菌组无统计学差异(p=0.06,0.07,p>0.05)；与模型组比较,痛泻要方组和双歧杆菌组体重增长较快,差异有统计学意义(p<0.05)；与痛泻要方组比较,双歧杆菌组无统计学差异(p>0.05)。3、大鼠模型鉴定结果：(1)造模期间大鼠体重变化：造模14天以后,模型组体重增长缓慢。与正常组比较,模型组体重开有统计学差异(p=0.02,p<0.05)；造模第28天,与正常组比较,各模型组大鼠体重均有显著统计学差异(p=0.00,p<0.01)。(2)大鼠粪便性状评分的变化：造模结束后,各模型组大鼠粪便性状积分值显著高于正常对照组(p=0.00)；与正常对照组比较,各模型对照组差异有显著性统计学意义(p<0.01)。(3)大鼠痛阈值及肠道敏感性变化：造模结束后,各模型对照组大鼠痛阈值降低,肠道敏感性增高(p=0.00)；与正常对照组比较,差异有显著性统计学意义(p<0.01)。(4)敝箱实验评分结果：造模结束后,各模型组大鼠敞箱运动分值降低(p=0.00)；与正常组比较,差异有显著性统计学意义(p<0.01)。(5)糖水偏嗜度变化：造模结束后,各模型组大鼠糖水摄取量降低(p=0.00)；与正常组比较,糖水偏嗜度有显著性统计学差异(p<0.01)。4、大鼠血清5-HT及VIP含量的变化：(1)7天治疗结束后,各组大鼠血清5-HT、VIP的含量变化：正常组最低,模型组最高。与正常组比较,模型组、痛泻要方组及双歧杆菌组5-HT、VIP含量有显著统计学差异(p<0.01)；与模型组比较,痛泻要方组及双歧杆菌组无统计学差异(p>0.05)；与痛泻要方组比较,双歧杆菌组无统计学差异(p>0.05)。(2)治疗14天结束后,各组大鼠血清5-HT、VIP含量变化：模型组最高,痛泻要方组和双歧杆菌组接近正常组。与正常组比较,模型组5-HT、VIP含量有显著统计学差异(p<0.01)；与模型组比较,双歧杆菌组和痛泻要方组血清5-HT、VIP含量降低,差异有统计学意义(p<0.05)；与痛泻要方组比较,双歧杆菌组无统计学差异(p>0.05)。结论：1、慢性轻度不可预见性应激联合高脂高糖高热饮食、高温高湿环境同步造模可以建立属于中医证型的肝郁脾虚IBS-D动物模型。通过痛泻要方治疗IBS-D“以方测证”,中医治疗肝郁脾虚证IBS-D有效。2、本实验研究发现,在治疗7天后,双歧杆菌组及痛泻要方组血清指标5-HT、VIP浓度值仍高于正常组水平,接近模型组水平；在第14天治疗后,痛泻要方组及双歧杆菌组血清指标5-HT、VIP浓度值接近正常组水平。提示中医痛泻要方及双歧杆菌治疗IBS-D有效。