二妙丸类方抗湿热证痛风物质基础与生物效应的相关性研究

本论文结合中医药的理论,选用二妙丸、三妙九、四妙丸及加味四妙丸作为一组基本方与类方,以湿热证痛风主要病理特征为依据,选用抗炎、镇痛、降尿酸及免疫为效应指标,在整体药物及有效部位的层次上评价抗痛风效应物质基础及其生物效应,并进行配伍机制研究;再进一步在细胞学水平上挖掘有效部位及有效成分生物活性及其配伍机制,用模糊聚类统计分析方法进行逻辑关联,探讨二妙丸类方抗湿热证痛风物质基础与生物效应的逻辑关联,探索中医方剂基本方到类方的配伍规律研究途径。 本论文主要研究内容如下: 首先,以抗炎、镇痛、降尿酸及免疫作用为指标,采用二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎实验、醋酸所致小鼠的扭体镇痛实验、小鼠高尿酸模型的降尿酸实验以及小鼠的碳粒廓清实验,评价二妙丸类方(全方)及去多糖二妙丸类方抗湿热证痛风的药效,初步评价二妙丸类方之间作用规律的差异,确定免疫作用的物质基础。 其次,制备二妙丸类方的有效部位群供试品,以抗炎、镇痛、降尿酸及免疫作用为指标,采用二甲苯致小鼠耳肿胀的抗炎实验、醋酸所致小鼠的扭体镇痛实验、小鼠高尿酸模型的降尿酸实验以及小鼠的碳粒廓清实验,评价有效部位群的抗湿热证痛风的药效,明确起药效作用的有效部位群;在此基础上进一步在细胞水平上研究有效部位群对过氧化氢诱导的血管内皮细胞胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨有效部位群抗湿热证痛风的抗炎作用机制,分析类方有效部位群药效作用的相关性。 重点研究有效部位配伍作用机制。对组方药进行有效部位的分离纯化和含量测定,为进一步的药效学研究奠定基础;分离出各组方药的多糖部位,进行正交组合,采取小鼠的碳粒廓清实验、细胞免疫和体液免疫实验探讨二妙丸类方多糖部位非特异性和特异性免疫作用机制;对各组方药分离出来的挥发油、总皂苷、生物碱、总黄酮、有机酸及水液(糖)等有效部位进行正交组合,研究二妙丸类方有效部位降尿酸配伍机制;在此基础上建立尿酸盐诱导的血管内皮细胞损伤模型,在细胞水平探讨有效部位对尿酸盐诱导的血管内皮细胞活力的影响,研究二妙丸类方有效部位调控血管内皮细胞活力的配伍机制;进一步用尿酸盐诱导的血管内皮细胞损伤模型以及过氧化氢所致血管内皮细胞损伤模型,研究有效成分对血管内皮细胞活性的影响。 最后,通过模糊聚类统计分析方法将二妙丸类方及其有效部位群与抗湿热证痛风生物效应进行聚类分析,探讨二妙丸类方物质基础与生物效应的逻辑关联。 结论:二妙丸类方抗湿热证痛风的生物效应相互联系,又有明显差异,加味四妙方突显抗湿热证痛风的效应。它们在物质基础与生物效应方面具有隶属相关性。