产黄酮类物质银杏内生真菌菌株的初步研究

植物内生真菌是近年深受重视的一类重要微生物资源，一般认为它们可产生与宿主植物相同或相似的生物活性物质。本研究以传统药用植物银杏为对象，寻找能产生黄酮类物质的内生真菌，为黄酮类物质开辟微生物发酵生产的途径。结果在银杏组织中分离得到了85株内生真菌，初步鉴定发现了分别属于刺盘孢属Colletotrichum、球壳孢属Sphaerosi、镰刀菌属Fusarium、匐柄霉属Stemphylium、盘长孢属Gloeosporium、蜜孢霉属Sphacelia、球座菌属Guignardia等属的菌种。抑菌试验表明其中4个菌株的代谢物对某些细菌有明显的抑制效应；显色反应表明以上4株菌均能够产生黄酮类物质，且其中一个菌株EG4的总黄酮产率稳定。EG4培养液经TLC与HPLC分析证明存在与银杏黄酮对照品相同和相似的组分。UV谱分析显示该组分可能具有黄酮母核结构，且具有4’—羟基、A环酚羟基、5—羟基、4—羰基、7—OH、6位、8位同时具有含氧取代基、不具有邻二酚羟基。对该菌株的培养生物学特性研究表明，EG4在马铃薯葡萄糖培养基上生长较好，最佳生长碳、氮源分别为葡萄糖和NH4+；乳糖、NO2-和尿素则能够促进其产生黄酮类物质；最适培养温度为28℃，最佳pH值为自然pH值6.8；100mL／250mL的装液量、100r/min的转速较利于生长；维生素B1、B2、C和叶酸都能不同程度的促进其生长，叶酸还能显著提高黄酮产率；该菌产黄酮代谢受Ca（2+）的调节，Ca（2+）能明显促进其产黄酮能力的提高。正交优化试验表明该菌较适宜的发酵条件为：20g/L乳糖、3.2g/L尿素、28℃的培养温度、自然pH值、100mL/250mL的培养基装液量、100r/min、0.5g/L的CaCl2和微量叶酸。