杜仲籽提取物对去势大鼠骨质疏松的作用机制研究

杜仲是《神农本草经》的上品药材,具有补中益气、强筋骨的效用,国内外对于杜仲抗骨质疏松症的研究多采用杜仲皮或杜仲叶。杜仲籽是杜仲的成熟翅果,根据《本草图经》中对杜仲籽的记载——“实苦涩,亦堪入药”,本课题拟通过优化提取工艺条件分离纯化杜仲籽中的环烯醚萜苷类物质,采用体外细胞培养技术考察杜仲籽提取物对成骨细胞的作用,选择去势模型大鼠在整体动物水平上研究杜仲籽提取物对动物骨质的改善作用,综合评价杜仲籽提取物对骨质疏松的防治效果,探讨作用机制和物质基础。 杜仲籽提取工艺优化采用浸泡法与超声辅助萃取法相结合的方法。研究杜仲籽提取物对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响试验采用MTT法、碱性磷酸酶活性测定、茜素红染色等方法。选择双侧卵巢摘除术构建OVX模型大鼠,双能X射线吸收测量法动态监测OVX大鼠骨密度,三点弯曲力学试验测量动物股骨骨折力、小动物骨骼强度测量仪测定骨骼压碎力等骨生物力学指标,使用Micro-CT技术分析股骨骨小梁微变化,ELISA法测定骨代谢生化指标、血清雌激素水平,全自动生化分析仪检测血清及尿液中Ca、P、Cr、ALP等含量,综合评价杜仲籽提取物对OVX大鼠骨质疏松的防治作用。 经工艺条件优化后杜仲籽中桃叶珊瑚苷的提取率达到69.19%。桃叶珊瑚苷为杜仲籽提取物促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的主要活性组分,浓度为25.6ng/ml时促进作用最显著,浓度高于25.6ng/ml时,杜仲籽提取物促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用随浓度增大逐渐减弱,结果表明杜仲籽提取物具有促进成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。给予OVX大鼠杜仲籽提取物治疗后,治疗组动物BMD、骨折力、骨压碎力、股骨骨小梁数目、骨小梁厚度、骨小梁分离度等参数指标均显著高于模型组动物,大鼠血清中E2及ALP、骨钙素、骨保护素、核因子κB受体活化因子配体等指标均有不同程度的改善,尿液中钙、磷、肌酐、钙/肌酐、磷/肌酐的水平均有所下降。揭示杜仲籽提取物具有调节骨质疏松动物骨代谢,增加骨密度,提高骨骼强硬度,改善骨组织微结构的作用,为研发安全有效防治绝经期骨质疏松症药物提供了实验基础。