目的刚地弓形虫是人和动物感染率极高的一种机会致病原虫,其中速殖子阶段是主要的致病阶段。速殖子的大规模全蛋白质组学分析仍然还在进行,但目前尚无弓形虫的完全蛋白质组图。所以本研究应用蛋白质组学技术分析刚地弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)组分,寻找具有免疫原性的抗原,为弓形虫疫苗有效候选抗原研究提供理论和实验依据。
方法常规复苏弓形虫速殖子,腹腔接种BALB/c小鼠,转种3次恢复其活力,收集腹腔冲洗液,纯化,离心,上清液即为STAg,用三氯醋酸丙酮沉淀法制备2-DE样品。STAg样品,通过等电聚焦和SDS-PAGE电泳技术分离获得弓形虫STAg组分全蛋白点,用兔抗弓形虫血清和兔纯血清(阴性对照)做免疫印迹获得免疫原性的蛋白点。切取这些点、进行胶内酶解,ABI4700质谱仪对蛋白点进行鉴定分析。
结果2-DE凝胶图显示1227个蛋白斑点,经质谱对其鉴定,得到230个弓形虫蛋白点,Western blot检测显示,16个蛋白点具有免疫原性。这些蛋白点中,主要表面抗原1(SAG1, 4个斑点)曾有报道具有免疫原性,热休克蛋白70(Hsp70)的免疫原性尚存在争议,其余的这些蛋白点:假定的蛋白质二硫键异构酶(putative protein disulfide isomerase),冠蛋白(coronin),热休克蛋白60(Hsp60),丙酮酸激酶(pyruvate kinase)2个点斑点,谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase, putativ),,蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1),苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase),尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase)2个斑点和过氧化氧化还原蛋白(peroxiredoxin)都具有免疫原性均为本研究新发现。
结论对所得到的16个阳性蛋白点进行分析,除SAG1(P30)和Hsp70外,其余9种具有免疫原性的抗原均为本研究新发现。这些免疫原性的蛋白点均非表面抗原或排泄-分泌抗原,而是存在于速殖子内。此结果提示,弓形虫速殖子内存在一些尚未证实的免疫原性抗原,可能具有更强的保护性,有深入研究的必要性,可作为弓形虫免疫诊断和疫苗研发新的候选分子。
