基于Notch通路探讨片仔癀对大肠癌干细胞增殖、凋亡、分化的影响及作用机制

目的：通过细胞实验研究片仔癀(PZH)对大肠癌干细胞生长的影响,并探讨PZH作用于大肠癌干细胞的分子机制,为其临床治疗大肠癌提供更丰富的理论基础。方法：1.片仔癀对大肠癌干细胞生物学影响：选择大肠癌细胞SW480和HT-29两株细胞,分别用不同浓度(0,0.25 mg/mL,0.5 mg/mL,0.75 mg/mL) PZH干预24 h后,采用侧群细胞(SP)分析法检测PZH对两株大肠癌细胞中干细胞比例的影响。然后采用SP法分别从两株大肠癌细胞中分选出大肠癌干细胞,并用不同浓度PZH进行干预。采用MTS检测大肠癌干细胞增殖情况；通过Hoechst 33324染色观察大肠癌干细胞凋亡情况；通过Q-PCR检测CK20的表达评估PZH对大肠癌干细胞分化的影响。2.片仔癀抑制大肠癌干细胞生长的分子机制：选择大肠癌细胞SW480,通过SP法分选出大肠癌干细胞,并用不同浓度PZH干预,采用Q-PCR 和 Western Blot分别检测片仔癀对大肠癌干细胞Notch信号转导通路中关键基因Notch1、Hes1在基因和蛋白水平表达的影响。结果：1.片仔癀对大肠癌干细胞生物学影响：(1)PZH干预显著降低大肠癌干细胞比例：SP分析法检测显示PZH干预能够显著降低两株大肠癌细胞中干细胞的比例,并呈现一定的剂量依赖性(P<0.05)；(2)PZH干预抑制大肠癌干细胞增殖：MTS检测显示PZH干预能够显著降低两株大肠癌细胞中干细胞的活力,并呈现一定的剂量依赖性(P<0.05)；(3)PZH干预诱导大肠癌干细胞凋亡：Hoechst 33342染色结果显示随PZH浓度增加,SW480和HT-29干细胞中均有细胞核出现高染或核固缩变亮的细胞数增加的现象；(3)PZH干预能够显著增加分化指标CK20的表达：Q-PCR 和 Western-blot检测提示PZH在大肠癌干细胞中均能够显著上调CK20的表达(P<0.05)。2.片仔癀作用大肠癌干细胞的分子机制：PZH干预能够调节大肠癌干细胞中Notch信号通路：Q-PCR 和 Western Blot检测提示PZH能够显著下调SW480干细胞Notch信号转导通路中关键基因Notch1, Hes1在基因和蛋白水平的表达。结论：细胞实验证实片仔癀具有显著抑制大肠癌干细胞增殖、促进细胞凋亡和分化的作用,且通过调控Notch信号转导通路中关键基因Notch1、Hes1的表达可能是其重要机制。