杜仲愈伤组织培养及次生代谢产物含量的研究

本试验探讨了基本培养基、接种方式、外植体种类、采样时间、培养条件、植物生长调节剂等因素对杜仲愈伤组织诱导、继代培养的影响以及培养基成分、培养条件等对愈伤组织中的药用有效成分绿原酸、总黄酮的积累进行了研究，主要取得了以下研究结果： 1．比较了MS，LS，B5，N6，H，Nitsch，White和WPM8种基本培养基，发现MS培养基适合于杜仲幼茎愈伤组织诱导，B5培养基不仅对叶的愈伤组织诱导有利，对茎和叶愈伤组织的继代培养也是比较理想的。 2．2,4-D、NAA和IBA三种生长素均可100％诱导出愈伤组织，以0.5mg／L 2,4-D、0.5-1.0mg／L NAA、1.0mg／L IBA效果最好；2,4-D和BA及KT的组合均不利于愈伤组织诱导，低浓度的BA与NAA和IBA组合能促进愈伤组织的诱导和生长，其中1.0mg／L NAA+0.3-0.5mg／L BA、1.0mg／L IBA+0.5mg／L BA诱导出的愈伤组织生长旺盛，富有光泽，适合进一步继代培养，而高浓度则起抑制作用。在继代培养中单独使用NAA时，以0.5mg／L效果最好。NAA与细胞分裂素配合使用时，以0.5mg／L NAA+0.5mg／L BA的组合最有利于愈伤组织的生长，其愈伤组织生长量明显大于单独使用NAA。KT的加入对愈伤组织的诱导及生长均有抑制作用。 3．田间材料取样时间幼叶以3月中旬为好，幼茎以4月中旬以前最佳；其余时间以无菌苗的下胚轴、子叶、真叶诱导效果最好。愈伤组织的诱导和生长培养基pH值以6.3比较适宜；培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养有利于愈伤组织诱导；茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放诱导效果最好。 4．糖以分析纯的蔗糖比葡萄糖和市售普通白糖更有利于愈伤组织的诱导和生长。当蔗糖浓度为40mg／L时不仅有利于愈伤组织的增长，也有利于总黄酮的积累。 5．系统研究了B5培养基中大量元素、微量元素、蔗糖浓度对杜仲愈伤组织生长和次生代谢产物积累的影响。实验证明：增加培养基中KNO3、（NH4）2SO4、ZnSO4和FeSO4的含量有利于愈伤组织生长，而不利于绿原酸和总黄酮的积累；MgSO4对细胞的生长和绿原酸、总黄酮的积累均起抑制作用；增加培养基中NaH2PO4、CaCl2的浓度不仅有利于愈伤组织的生长也有利于绿原酸、总黄酮的积累。MnSO4有利于愈伤组织的生长和绿原酸的积累，而显著抑制黄酮的形成。蔗糖对愈伤组织生长和次生代谢产物的积累多有显著的促进作用。