玉米大斑病菌特异性毒素组分的纯化及化学结构

玉米大斑病是玉米生产上的一种主要叶部病害。大量研究表明，病原物(Exserohilum turcicum(Pass.)Leonard et Suggs)产生的致病毒素(HT-毒素)，是诱致该病发生的主要原因。 本试验以玉米大斑病菌2号小种99-2菌株为材料，利用高效液相色谱(HPLC)技术，通过分离图谱、峰高、峰面积等不同的角度相互比较，对HT-毒素分离、纯化的最佳条件进行了摸索。试验结果表明：利用超纯水作为流动相能够较好地将HT-粗毒素分离；在254nm～269nm波长范围内，紫外检测灵敏度高，便于毒素组分的观察与制备；流动相的pH值对HT-毒素的分离度有很大影响，在pH3.25时，各色谱峰分离度较好；空白对照表明，在检测波长范围内及最适pH值条件下，流动相无任何紫外吸收。试验选用1.8mL/min作为流动相的流速，并在57分钟后加入2％甲醇。这样，HT-毒素完成一次分离需要80分钟，可分离到13个组分。 利用离体叶片针刺法，对分离、制备的各组分的生物测定结果表明，组分1、组分3(为混合组分)和纽分6对供试的玉米品种均表现出不同程度的毒性。组分3和组分6在OH43Ht，玉米上引起的病斑面积大于在其它品种上的病斑面积。经HPLC分析比较，组分6与本实验室前期工作分离到的特异性组分(HT-7)为同一组分。此外，本试验还分离到了一些无毒性的组分，并对活性组分6的纯度进行了定性分析。 对标准毒素组分(5-羟甲基-2 呋喃甲醛)进行HPLC分析发现，该组分与本试验分离到的组分8的保留时间相同。 在HPLC分析的基础上，对活性组分进行了制备，并利用质谱(MS)、核磁共振(NMR)和红外光谱(IR)等波谱手段对组分1和组分6的化学结构进行了初步鉴定。推测组分1的分子量可能为163，含甲基、亚甲基、-C-O-等的糖类；组分6可能为含有不饱和双键、羰基、亚甲基、分子量为142的化合物。具体的化学结构还有待于进一步分析鉴定。