颈椎间盘在颈性眩晕发病中作用的实验研究

目的:1、了解正常大鼠颈椎椎间盘神经分布情况（分布部位、长入深度）及种类（交感神经、感觉神经）;2、观察大鼠颈椎间盘内压力变化时其椎-基底动脉血供区（枕后部—枕外隆突旁）血流灌注的变化;3、探讨颈椎间盘因素（神经因素、间盘压力因素）在颈性眩晕发病中可能的作用机制。 方法:本实验选取40只成年Wistar大鼠作为实验对象,体重250g300g,雌雄不限。1、应用免疫组织化学SP法对颈椎间盘内交感神经和感觉神经两种肽能神经纤维进行定性、定位观察,显微镜下观察其分布特点;2、应用激光多普勒测定颈椎间盘内压力变化时椎-基底动脉血流变化情况。3、应用SAS6.12统计软件对数据进行分析。率的比较应用四格表资料的Fisher确切概率法;计量资料采用配对t检验。实验共分为实验一和实验二两部分。 实验一:随机从40只实验用Wistar大鼠中选择8只,每只大鼠切取C5/6,C6/7颈椎间盘单位作为实验标本,标本取材后固定、脱钙、石蜡包埋,然后连续石蜡切片,切片厚度为5μm。每一颈椎间盘单位（包括椎间盘及上下终板软骨）连续切片去掉终板软骨后切取切片行HE染色观察。选择HE染色椎间盘大体形态完整的4张切片,其中2张进行免疫组织化学染色分别观察交感神经纤维和感觉神经纤维的分布情况,另外2张用做免疫组化空白对照。取自体空肠组织切片同时染色作为阳性对照。 实验二:随机从40只实验用Wistar大鼠中选择16只平均分为两组:C5/6刺激组和C6/7刺激组。每组颈椎间盘内给予压力刺激,用激光多普勒血流仪测定刺激前后椎基底动脉血供区（枕后部—枕外隆突旁）血流量变化。 结果: 1、实验一 1.1 HE染色:光镜下见椎间盘外形近左右为长轴的椭圆形,前缘较凸,后缘较凹。间盘由髓核和纤维环构成。髓核位于中央偏后方,为柔软而富有弹性的胶样物质,周围为板层状的纤维环,纤维环成同心圆样围绕在髓核的周围,纤维环排列整齐。纤维环的前方和后方部分在外形上是不同的。纤维环的前面部分在中线上最厚,随着向椎间盘的两侧,厚度逐渐变薄。纤维环前部呈新月形,而后方由一薄层的胶原纤维构成。 1.2免疫组化对照实验:空白对照实验结果均呈阴性;阳性对照实验结果显示小肠壁内含丰富的SP、NPY免疫反应阳性的神经纤维。 1.3免疫组织化学表达结果:免疫组织化学SP方法特异性好,背景不着色或浅黄色。实验组SP和NPY免疫反应阳性神经纤维在C5/6,C6/7椎间盘纤维环的前缘和后缘均有分布。NPY神经纤维在C5/6椎间盘前缘和后缘阳性表达率分别为63%（5/8）和50%（4/8）;SP神经纤维在C5/6椎间盘前缘和后缘阳性表达率分别为75%（6/8）和50%（4/8）;C6/7椎间盘前缘和后缘NPY神经纤维阳性表达率分别为50%（4/8）和63%（5/8）;C6/7椎间盘前缘和后缘SP神经纤维阳性表达率分别为63%（5/8）和75%（6/ 8）。实验组两种神经纤维免疫组化阳性表达率与空白对照组（阳性表达率为0）比较均有统计学意义（P<0.05）。同一椎间盘节段前缘和后缘神经分布阳性表达率情况比较无统计学意义（P>0.05）。免疫反应阳性纤维呈浅棕色至深棕色不等,显示点线状或膨大的颗粒状,分布在纤维环的外1/3近边缘处。 2、实验二 C5/6颈椎间盘后方压力刺激前后,椎-基底动脉血供区（枕后部—枕外隆突旁）血流量分别为111±5（PU）和109±10 （PU）,血流量变化刺激前后比较无统计学意义（p>0.05）。C6/7颈椎间盘后方压力刺激前后,椎-基底动脉血供区（枕后部—枕外隆突旁）血流量分别为111±15（PU）和104±10（PU）,血流量变化刺激前后比较无统计学意义（p>0.05）。 结论:分布于颈椎间盘的交感神经和感觉神经纤维是感受椎间盘病变刺激的生理基础,该两种肽能神经受到刺激可能与交感神经激惹一系列症状有关,该两种肽能神经可能在颈性眩晕的发病中起着重要作用。间盘内压力增高是退变椎间盘内常见的一种病理刺激,可能会通过刺激间盘内神经纤维引起交感神经受到激惹。然而本实验结果显示正常颈椎间盘内有压力刺激时受交感神经支配的椎-基底动脉血流灌注无明显变化,提示正常椎间盘内的压力刺激可能并不至引起眩晕的发病。