植物内生真菌抗真菌抗肿瘤活性的研究

植物内生真菌是一个庞大的特殊真菌类群，次生代谢产物非常丰富，包括杀虫、抗菌、抗肿瘤等活性物质，是人们寻找新型抗菌、抗肿瘤药物的重要资源。本课题的工作主要包括南方红豆杉、三尖杉及香榧内生真菌的分离；内生真菌抗真菌、抗肿瘤活性菌株的筛选；以及对抗肿瘤高活性菌株H18-036的活性物质的初步研究。 从采集自福建省沙县、武夷山等地的三尖杉（Cephalotaxus Fortunei）、南方红豆杉（Taxus mairei）及香榧（Torreya grandis）的内皮层和韧皮部中，分离到172株植物内生真菌。抗真菌活性检测结果表明，90株内生真菌对一种或多种植物病原真菌——红色面孢霉（Neurospora Sp.）、木霉（Trichoderma sp.）、镰刀菌（Fusariumsp.）等有抑制作用，占供测真菌总数的52.3％。来自三尖杉、南方红豆杉和香榧的内生真菌的抗真菌活性菌株比例分别为40％，54.2％及57.1％。其中抑菌圈直径大于15mm的高抗菌株有35株。按Ainsworth等鉴定系统和方法进行鉴定，具有抗真菌活性的内生真菌主要分布于拟青霉属（Paecilomyces）、镰孢菌属（Fusarium）等17个属中。 利用抗肿瘤体外细胞毒筛选模型（MTT法）对内生真菌进行活性检测。结果表明，共有25株内生真菌（占总分离菌株的14.5％）对KB（人口腔上皮癌）或HL-60（人白血病）细胞具有显著的抑制活性。三尖杉、南方红豆杉及香榧内生真菌的抗肿瘤活性菌株占各供测菌株的3.3％，19.6％和8.6％。其中7个菌株的细胞毒ID50在1,000以上，占总供测菌株的4.1％。菌株的初步鉴定结果显示，抗肿瘤活性菌株主要分布在拟青霉属及头孢霉属（Cephalosporium）中。 在抗肿瘤高活性菌株中，菌株H18-036对KB及HL-60细胞有明显抑制作用，初步鉴定为一种拟青霉（Paecilomyces sp.）。对其发 摘要－11－ 酵液活性物质进行分离纯化，得到一个结晶及5个纯度较高的组分。 该结晶与＊－036发酵液有机抽提所得结晶布雷菲德菌素A具有相 同的Rr值、显色反应，初步判定为布雷菲德菌素A。5个纯度较高的 组分经薄层层析检测及官能团显色反应，初步断定为生物碱类物质或 含有氨（胺）基且易被氧化物质。MTT测定结果显示，至少有3个组 分对HL－60细胞具有较高的抑制活性，其ID。。分别为800，＞2，000， 800，具有深入研究的价值。