地黄低聚糖对自体骨骼肌成肌细胞移植治疗心肌梗死效应和机制的研究

背景: 现代中医理论认为干细胞从产生到功能均与传统中医理论中的“先天之精”有显著关联。中医经典理论认为藏腑中的“肾”是成年个体储存“先天之精”器官。因此,具有补肾、益气、养血功能的中药材(地黄)可能对干细胞的生物学特性发挥效应。 目的: 观察骨骼肌成肌细胞(SMs)移植治疗心肌梗死(MI)时地黄低聚糖(RGOs)的治疗作用,并在离体培养细胞水平,探索这种治疗作用的产生机制。 方法: 第一部分:以鲜地黄用热乙醇和热水提取,以阳离子和阴离子交换,再经离子交换树脂洗脱得到其纯化物,以HPLC法检测其纯度。 第二部分:分离成年大鼠SMs,给予不同浓度RGOs干预,记录生长曲线,观察其对SMs增殖影响以及对IGF-Ⅱ分泌的作用;用免疫组化的方法检测RGOs干预后,SMs内CX-43、TNI、CK-MR等心肌特异性物质的表达;运用膜片钳技术研究SMs与心肌细胞瞬时外向钾电流的差异以及RGOs的影响;最后以流式细胞仪检测RGOs对缺氧条件下SMs的抗凋亡作用。 第三部分:9只贵州香猪分为3组,经冠状动脉内球囊封堵构建小型猪急性MI模型14天后,分别经心外膜在梗死区域给予空白生理盐水对照、自体SMs移植、自体SMs移植联合RGOs粗提物4g/天治疗30天。以心脏超声评价各组动物在治疗后心功能变化情况,以组织多普勒比较细胞移植区域的心肌收缩力变化:以24小时动态心电图观察移植术后24小时内的心律失常;以骨髓涂片观察骨髓动员情况、流式细胞仪检测外周血CD34+数目,并检测各组动物血清IGF-Ⅱ的差异。最后,以免疫组化和大体病理观察SMs移植区域心肌修复情况。